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人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟及優(yōu)點(diǎn)
閱讀：438 發(fā)布時(shí)間：2021-5-11人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟:
1. 以稀釋液將待檢標(biāo)本做適當(dāng)稀釋（預(yù)試中確定）加入包被有已知抗原的酶標(biāo)板中（50ul/孔），加封口膠帶于37℃作用30min。
2. 棄反應(yīng)液，以沖洗液連續(xù)洗板5次并于吸水紙上拍干。
3. 加入酶標(biāo)抗體（濃度在預(yù)試中確定）。加封口膠帶后于37℃作用30min。
4. 重復(fù)第2步。
5. 加底物（濃度在預(yù)試中確定），加封口膠帶后于室溫下避光作用5-60 min，其間不時(shí)觀察，顯色滿意后加終止液50ul/孔。
6. 于酶標(biāo)儀測定OD值，OPD用492nm測定，TMB用450nm測定。
人ELISA試劑盒優(yōu)點(diǎn)：
（1）特異性高：進(jìn)行了廣泛的非特異性排查，避免了由于交叉反應(yīng)和干擾導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)誤差。
（2）精度高：通過加標(biāo)回收率和線性稀釋實(shí)驗(yàn)，確保樣本值的準(zhǔn)確性，度高于同類產(chǎn)品（較低的CV%）。
（3）重復(fù)性好：lot-to-lot檢測確保zui小的批間差異。
（4）可靠性強(qiáng)：經(jīng)優(yōu)化的試劑盒組分可有效的阻止假陽性和假陰性試驗(yàn)結(jié)果。
（5）標(biāo)準(zhǔn)曲線：在保證數(shù)據(jù)的前提下提供較寬的檢測范圍，以滿足需求。
（6）價(jià)格低廉：*試劑，國內(nèi)分裝配置，大大減少了客戶因?yàn)閮r(jià)格高而必須購買國產(chǎn)試劑盒的顧慮。
人ELISA試劑盒注意事項(xiàng):
1. 每次實(shí)驗(yàn)均應(yīng)做陰性對照、陽性對照及空白對照（以PBS代替標(biāo)本），后者為本底值，在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)扣除本底值，陽性對照<陰性對照<空白對照實(shí)驗(yàn)成立。
2. 一般認(rèn)為小分子抗原宜用本法檢測，而大分子抗原則宜采用夾心法檢測，但具體宜采用哪種方法應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)決定，本發(fā)與夾心法相比在操作上減少一步。包被抗體與酶標(biāo)抗體如果分別采用單克隆抗體和多克隆抗體時(shí)，宜用單克隆抗體作為包被抗體，以多克隆抗體作為酶標(biāo)抗體。
3. 血清標(biāo)本中抗原濃度一般較低，故一般用原倍標(biāo)本進(jìn)行檢測，必要時(shí)可進(jìn)行稀釋測定，但應(yīng)重新摸索酶標(biāo)抗原的濃度，以確保方法的靈敏性。
4. 以酶標(biāo)記抗原的方法同酶標(biāo)記抗體。
5. 其它注意事項(xiàng)同酶聯(lián)免疫間接法。