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探討影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果洗板操作
閱讀：215 發(fā)布時(shí)間：2022-10-10在做ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí)，洗板有兩種方法：手工法洗板和洗板機(jī)洗板。二者沒有本質(zhì)的差別,只要操作合乎要求, 均能得到正確、可靠的結(jié)果。
手工洗板是每次反應(yīng)溫育后,將反應(yīng)液吸出或甩干,然后在板孔中加滿洗液,放置2～3 min后,將洗液吸出或甩干再在吸水紙上拍干。重復(fù)上述洗滌步驟3～4次,最后在吸水紙上拍干即可。手工洗板人為因素比較大,實(shí)驗(yàn)人員必須經(jīng)驗(yàn)豐富,洗滌次數(shù)要足夠,沖擊力又不要太大,加入的洗液量以剛滿反應(yīng)孔為限,防止孔口內(nèi)有游離酶未能洗凈,同時(shí)防止孔與孔之間液體交叉。洗滌結(jié)束后扣干亦非常重要,否則易造成假陽性。每次洗完板后,在吸水紙上輕輕拍干,拍板時(shí)要垂直,避免交叉感染。用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;吸水紙要一次性使用,應(yīng)使用不易脫落碎屑的吸水紙為宜。酶結(jié)合物不耐干燥,特別在較高的溫度下更易失活,所以拍干的反應(yīng)板應(yīng)盡量縮短在空氣中暴露的時(shí)間,時(shí)間越長(zhǎng),吸光度值越低。
洗板機(jī)洗板是將手工操作改由洗板機(jī)進(jìn)行,人為因素少,速度快,條件恒定,但是使用洗板機(jī)洗板的一個(gè)特點(diǎn)是,每次洗板后不能拍干,故有較多的液體殘留,需增加洗板次數(shù)來減少這種誤差。洗板機(jī)洗板次數(shù)越少,假陽性越高,本實(shí)驗(yàn)中,洗板1次,假陽性率高達(dá)90%;洗板2次,假陽性率為38%;洗板3次,假陽性率為2%;洗板4～5次,未出現(xiàn)假陽性。洗板次數(shù)并非越多越好,太多不但浪費(fèi)人力、物力,并且也會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果,所以一般試劑盒要求洗板4～5次即可。洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時(shí)可用注射器針頭挑出。為了洗滌效果較好,實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法,在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1～2次,能達(dá)到理想的洗滌效果。