化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
ELISA試驗陰性與陽性對照平均值計算與判斷
閱讀：1167 發(fā)布時間：2023-11-20陰性與陽性對照平均值計算與判斷：
1．陰性對照平均值NCx有效性計算判斷舉例：
（1）第一類NCx計算與評價：以HBsAg為例
Ⅰ. 設(shè)置3孔的NCx計算：NCx=（0.011+0.010+0.090）/3=0.010
Ⅱ. 任一個NC值應≤0.100至≥－0.010；
Ⅲ. 各NC值也應介于≥0.5×NCx至≤1.5×NCx之間。此時各孔的NC值均處于NCx±0.006范圍內(nèi)，其中遇有一孔NC值偏離該范圍時，則棄去該NC值，再計算NCx。如有2孔NC值超出該范圍時，本次試驗（無效）應予復試。
Ⅳ. 不同廠牌對NCx的具體要求略有不同，但總的原則幾為一致，如<法>巴斯德HBsAg EIA Kit。
（2）第二類NCx計算與評價：可包括抗—HBc、抗—HBe。以抗—HBc、抗—HBe為例：
Ⅰ. 取3孔陰性對照A值的平均值：
抗—HBc NCx=（1.027+0.989+1.278）/3=1.065
抗—HBe NCx=（1.169+1.088+0.993）/3=1.083；
請各位注意：這2個NCx是不是很接近1.00呀？也就是說，十分接近C.O.I.（C.O./S，或C.O./A）=1.00！這不是一種偶然，而是國際試劑（如雅培）的“質(zhì)量"標志。如果偏大，例如1.50以上，或者偏小，0.50以下，待檢樣本中會導致出現(xiàn)什么現(xiàn)象呢？請讀者自己思考吧。
Ⅱ. 各孔NC值均應＜2.000，并處于≥0.5×NCx至≤1.5×NCx之間。若其中1孔NC值偏離該范圍時，棄去，再計算2孔的NC值的NCx。如有2孔NC值偏離該范圍時，應重新試驗。2．陽性對照平均值PCx有效性計算與評價也分為兩類：
（1）第一類 PCx計算與評價：以HBsAg為例 DauI*sZmR
Ⅰ. 第一類PCx的計算不列入Cut off計算，可取（設(shè)）2—3孔陽性對照的平均值PCx（Abbott）： PCx=（1.024+1.030）/2=1.027。注意：本例雅培試劑HBsAg的Cutoff值=NCx+0.05=0.06，PCx 的S/C.O.=1.027/0.06=17.12。如果S/C.O.超過20.00以上，提示HBsAg陽性對照含量太高！
Ⅱ. 參照方法學的要求，也可規(guī)定PCx應≥1.000（指A值），而且各孔PC值要求≥0.5×PCx 至≤1.5×PCx
Ⅲ. PC的設(shè)置及PCx的計算，主要用于評價本次試驗結(jié)果是否有效和各批/次試驗結(jié)果的穩(wěn)定性和可比性，并不參與Cut off值的計算。同一個批號試劑及其陽性對照品在規(guī)定保存條件和有效期內(nèi)，各次試驗時PCx值也應保持相對穩(wěn)定水平。換句話說，實驗結(jié)果有效性評價時，也應觀測陽性對照的“統(tǒng)計過程控制"（SPC）處于穩(wěn)定狀態(tài)—輸出“控制圖"。
（2）第二類PCx的計算與評價：也以抗—HBc為例
Ⅰ. 可取（設(shè)）2—3孔PC 的A值得平均值PCx： PCx=（0.051+0.038）/2=0.045
Ⅱ. 參照方法學要求，也可規(guī)定各孔PC值應處于≥0.5×PCx 至≤1.5×PCx范圍內(nèi)。
Ⅲ. PCx值參與Cut off值的計算，例如抗—HBc的Cut off（Abbott）：
Cut off=0.4（NCx）+0.6（PCx）。
該值（Cut off）可以理解為：指示性定量HBcAg反應值的40%加定量抗—HBc反應值的60%之和，恰為健康人群血中抗—HBc正常值范圍的界限。任一待檢樣本的檢出值低于該Cut off值時則判為抗—HBc陽性，大于該Cut off值時則判為抗—HBc陰性。