化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
人Apelin-36ELISA檢測(cè)試劑盒
閱讀：166 發(fā)布時(shí)間：2014-7-17Apelin-36試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知Apelin-36濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將Apelin-36和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中Apelin-36的濃度呈比例關(guān)系。
此外，siRNA分子與DNA甲基化密切相關(guān)，尤其siRNA指導(dǎo)著對(duì)跳躍基因的甲基化過(guò)程。感到驚訝的是，當(dāng)植物被致病菌感染激活了特定轉(zhuǎn)座子時(shí)，這些siRNA的水平也發(fā)生了改變。從而改變對(duì)基因的調(diào)控。羊ELISA試劑盒發(fā)現(xiàn)植物遭遇致病菌后，其表觀遺傳學(xué)密碼會(huì)發(fā)生廣泛的大量改變，DNA中的表觀遺傳學(xué)密碼是協(xié)助調(diào)控基因表達(dá)一種指令信息。顯示這些表觀遺傳學(xué)改變與負(fù)責(zé)調(diào)控植物脅迫應(yīng)答的基因活性有關(guān)，這說(shuō)明表觀基因組能幫助植物對(duì)致病菌和其他環(huán)境脅迫產(chǎn)生抗性。
操作注意事項(xiàng)
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
有一些基因的表達(dá)與脅迫應(yīng)答中甲基化改變有關(guān)，植物的脅迫應(yīng)答引發(fā)了大量的甲基化修飾改變，從而幫助植物抵御入侵的致病菌。羊ELISA試劑盒為了限制感染的致病菌生長(zhǎng)，植物采用了一系列復(fù)雜的防御機(jī)制，激活多種激素信號(hào)來(lái)改變基因表達(dá)的網(wǎng)絡(luò)。顯示植物的這些細(xì)胞防御應(yīng)答通過(guò)DNA甲基化機(jī)制控制基因表達(dá)的網(wǎng)絡(luò)。這些遺傳物質(zhì)的表觀遺傳學(xué)改變，包括DNA甲基化模式的改變和組蛋白的修飾（組蛋白在基因調(diào)節(jié)中具有關(guān)鍵作用），可以不改變DNA序列而對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控。