欧美……一区二区三区,欧美日韩亚洲另类视频,亚洲国产欧美日韩中字,日本一区二区三区dvd视频在线

大鼠ELISA試劑盒中各溶液配方及作用
提質(zhì)粒是分子生物學(xué)中基本，easy的實(shí)驗(yàn)。*不需要借助大腦，直接照著提取試劑盒中的操作說明傻瓜操作即可（其實(shí)應(yīng)該由機(jī)器人在實(shí)驗(yàn)室中操作這些簡(jiǎn)單卻耗時(shí)的實(shí)驗(yàn)）。盡管操作簡(jiǎn)單，提質(zhì)粒卻也是一個(gè)比較重要的步驟，提出質(zhì)粒的質(zhì)量和數(shù)量將直接決定著后續(xù)實(shí)驗(yàn)室的成敗。當(dāng)我們按照試劑盒中操作說明進(jìn)行操作時(shí)，我們會(huì)看到P1，P2，N3, PE，EB等不同的溶液（不同試劑盒可能標(biāo)識(shí)不同）。那么大家是否知道每瓶溶液中裝的什么？它們?cè)谫|(zhì)粒提取過程中的作用又是怎樣的？
質(zhì)粒提取采用的是強(qiáng)堿裂解法（alkaline lysis），那么我們現(xiàn)在來看一下溶液 P1 ， P2， N3, PE, EB都是什么。
溶液1（P1）
組分濃度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10 mM EDTA，50 mM 葡糖糖（Glucose）
溶液1的主要作用是將菌體沉淀懸浮起來。25mM Tris-HCl是緩沖溶液，保證反應(yīng)體系的pH恒定。EDTA是金屬離子螯合劑，10 mM EDTA的作用是與微生物體內(nèi)的金屬離子相互結(jié)合，抑制DNase的活性。50 mM葡萄糖的作用是增加溶液的粘度，保證菌體懸浮，延緩菌體沉降的時(shí)間。溶液1在使用前通常要加入RNA酶（RNase A），RNA酶的作用很清楚，降解掉溶液中的RNA。由于RNA酶屬于蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)穩(wěn)定性很差，所以加了RNase A的溶液1需要低溫4oC保存。
溶液2（P2）
組份濃度 250 mM NaOH，1％（W/V）SDS（十二烷基硫酸鈉）
溶液2的主要作用是細(xì)胞裂解。溶液1將細(xì)胞懸浮后，就需要添加溶液2了，溶液2的作用就是對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解。溶液2只包括兩種成分：氫氧化鈉和SDS。真正起到到細(xì)胞裂解作用的是氫氧化鈉，這也是為什么這個(gè)方法會(huì)被叫做堿裂解法。氫氧化鈉會(huì)破壞細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)，使之發(fā)生bilayer（雙層膜）結(jié)構(gòu)向micelle（微囊）結(jié)構(gòu)的相變化，從而導(dǎo)致細(xì)胞的裂解。SDS的作用將在下一步提到。添加溶液2后需要注意的一個(gè)是時(shí)間一定不能過長，另一個(gè)是不可以劇烈震動(dòng)離心管。時(shí)間過長以及劇烈震動(dòng)都將導(dǎo)致氫氧化鈉破壞基因組DNA，斷裂的基因組DNA碎片將會(huì)與相似大小質(zhì)粒一同被抽提，污染樣品。
溶液3（N3）
組份濃度 3M 醋酸鉀（potassium acetate），5M 醋酸
溶液3的主要作用是中和第二步加入的強(qiáng)堿以及清除掉蛋白質(zhì)等細(xì)胞內(nèi)的雜質(zhì)。N是neutralized的縮寫。強(qiáng)堿溶液氫氧化鈉長時(shí)間與DNA基礎(chǔ)會(huì)破壞其結(jié)構(gòu)，因此需要進(jìn)行中和。中和氫氧化鈉，5 M醋酸就足夠了，為何又要加入醋酸鉀呢？做過質(zhì)粒提取實(shí)驗(yàn)的同學(xué)應(yīng)該記得，在加入溶液N3后，會(huì)有大量沉淀出現(xiàn)。這些沉淀其實(shí)醋酸鉀與溶液2中的SDS相互作用，反應(yīng)生成的十二烷基硫酸鉀（potassium dodecylsulfate, PDS）。加入溶液N3后，SDS遇到鉀離子，生成PDS不溶于水，會(huì)迅速發(fā)生沉淀。
那么溶液3的加入是如何清除掉蛋白質(zhì)，基因組DNA等雜質(zhì)的呢？道理是，溶液2中加入的十二烷基硫酸鈉(SDS)很容易與蛋白質(zhì)結(jié)合，平均兩個(gè)氨基酸就會(huì)結(jié)合一個(gè)SDS分子，二者結(jié)合會(huì)形成SDS2多肽復(fù)合體，這樣變性蛋白質(zhì)將溶解在溶液中，從而使得多肽鏈更好地與基因組DNA纏繞。加入溶液3后，由于十二烷基硫酸鹽與變性蛋白質(zhì)結(jié)合成復(fù)合體，十二烷基硫酸鉀的沉淀就將變性的蛋白質(zhì)一起沉淀，同時(shí)變性的蛋白質(zhì)與基因組DNA纏繞，結(jié)果也大部分被共沉淀了。而高離子濃度的溶液又加速了這一沉淀過程。此外，溶液被中和后變性蛋白質(zhì)表面電荷減少,也可以促進(jìn)變性蛋白質(zhì)沉淀。
大鼠ELISA試劑盒小鼠ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1(ABCA1)ELISA試劑盒 ，英文名： ABCA1 ELISA Kit

小鼠Apelin小鼠13蛋白(AP13)ELISA試劑盒 ，英文名： AP13 ELISA Kit

小鼠Apelin小鼠12蛋白(AP12)ELISA試劑盒 ，英文名： AP12 ELISA Kit

小鼠Apelin蛋白(APLN)ELISA試劑盒 ，英文名： APLN ELISA Kit

小鼠AMPA離子能谷氨酸受體4(GRIA4)ELISA試劑盒 ，英文名： GRIA4 ELISA Kit

小鼠AMPA離子能谷氨酸受體3(GRIA3)ELISA試劑盒 ，英文名： GRIA3 ELISA Kit

小鼠AMPA離子能谷氨酸受體2(GRIA2)ELISA試劑盒 ，英文名： GRIA2 ELISA Kit

小鼠ADP核糖轉(zhuǎn)移酶1(ART1)ELISA試劑盒 ，英文名： ART1 ELISA Kit

小鼠Ⅻ型膠原(COL12)ELISA試劑盒 ，英文名： COL12 ELISA Kit

小鼠Ⅹ型膠原(COL10)ELISA試劑盒 ，英文名： COL10 ELISA Kit

小鼠ⅩⅤ型膠原(COL15)ELISA試劑盒 ，英文名： COL15 ELISA Kit

小鼠Ⅶ型膠原(COL7)ELISA試劑盒 ，英文名： COL7 ELISA Kit

小鼠Ⅵ型膠原α1(COL6α1)ELISA試劑盒 ，英文名： COL6α1 ELISA Kit

小鼠Ⅴ型膠原α2(COL5α2)ELISA試劑盒 ，英文名： COL5α2 ELISA Kit

小鼠Ⅳ型膠原α1(COL4α1)ELISA試劑盒 ，英文名： COL4α1 ELISA Kit

小鼠Ⅳ型膠原(COL4)ELISA試劑盒 ，英文名： COL4 ELISA Kit

小鼠Ⅲ型前膠原氨基端原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒 ，英文名： PⅢNP ELISA Kit

小鼠Ⅲ型膠原交聯(lián)羧基端肽(CTXⅢ)ELISA試劑盒 ，英文名： CTXⅢ ELISA Kit

小鼠Ⅲ型膠原(COL3)ELISA試劑盒 ，英文名： COL3 ELISA Kit

小鼠Ⅱ型前膠原羧基端原肽(PⅡCP)ELISA試劑盒 ，英文名： PⅡCP ELISA Kit

小鼠Ⅱ型前膠原氨基端原肽(PⅡNT)ELISA試劑盒 ，英文名： PⅡNT ELISA Kit

小鼠Ⅱ型膠原交聯(lián)羧基端肽(CTXⅡ)ELISA試劑盒 ，英文名： CTXⅡ ELISA Kit

小鼠Ⅱ型膠原(COL2)ELISA試劑盒 ，英文名： COL2 ELISA Kit大鼠ELISA試劑盒