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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1612 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 胸腺組織 | 種屬來源 | 大鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 大鼠胸腺上皮細胞 | 商品貨號 | A01X1612 |
組織來源 | 胸腺組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 大鼠 | 傳代特性 | 可傳1-2代 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：1:2
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介 |
大鼠胸腺上皮細胞分離自胸腺組織；胸腺是機體重要的淋巴器官，其功能與免疫緊密相關，是T細胞分化、發(fā)育、成熟的場所，還可以分泌胸腺激素及激素類物質，具有內分泌技能的器官。胸腺上皮細胞和胸腺細胞是胸腺微環(huán)境的重要組成部分，其外，胸腺上皮細胞組成了胸腺細胞不同發(fā)育階段的三維結構，根據(jù)其在胸腺中位置不同，可分為皮質胸腺上皮細胞和髓質胸腺上皮細胞。胸腺細胞的發(fā)育和成熟是通過在胸腺皮質和髓質上皮細胞的遷移過程中相互作用完成的。此外，胸腺細胞通過皮質胸腺上皮細胞介導的陽性選擇和髓質胸腺上皮細胞介導的陰性選擇發(fā)育為能夠識別和耐受自身主要組織相容復合體和自身抗原的成熟T淋巴細胞。胸腺上皮細胞是構成胸腺微環(huán)境的主要成份，其形態(tài)、分布和功能多樣。表面抗原表達具有高度異質性，與胸腺細胞結合成不同類型復合體，部分胸腺上皮細胞相互排列構成囊泡樣結構。電鏡觀察，可把胸腺上皮細胞分為3-6型，用抗胸腺上皮細胞單克隆抗體熒光染色可把胸腺上皮細胞分為9種類型。 |
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈上皮細胞樣，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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人非小細胞肺腺癌細胞NCI-H2087(STR鑒定正確)
人食管癌細胞Kyse510(STR鑒定正確)
人肺癌細胞帶熒光素酶A549+LUC（STR鑒定）
小鼠畸胎瘤細胞/小鼠胚胎癌細胞F9（種屬鑒定）
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人橫紋肌肉瘤細胞A-673(STR鑒定正確)
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人B細胞淋巴瘤細胞 SU-DHL-2(STR鑒定正確)
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人Burkitt's淋巴瘤細胞NAMALWA(STR鑒定正確)
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Halomonas pacifica太平洋鹽單胞菌
Halomonas subglaciescola冰下鹽單胞菌
Halomonas aquamarina海水鹽單胞菌
Halomonas cupida渴望鹽單胞菌
Halomonas venusta美麗鹽單胞菌
Halomonas halophila嗜鹽鹽單胞菌
Halomonas halmophila喜海水鹽單胞菌
Halomonas eurihalina廣鹽鹽單胞菌
Lactobacillus murinus鼠乳桿菌
Halomonas salina鹽鹽單胞菌
大鼠胸腺上皮細胞Pseudoalteromonas luteoviolacea藤黃紫假交替單胞菌
Nesterenkonia halobia喜鹽涅斯特連科氏菌
Chromohalobacter marismortui死海色鹽桿菌
Bradyrhizobium japonicum慢生大豆根瘤菌
Proteus hauseri豪氏變形菌
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