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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1701 | 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 組織來源 | 腦子組織 | 種屬來源 | 大鼠 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 不規(guī)則細胞 |
詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 大鼠腦皮層神經(jīng)元細胞 | 商品貨號 | A01X1701 |
組織來源 | 腦子組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 大鼠 | 傳代特性 | 根據(jù)細胞特性 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 不規(guī)則細胞 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代神經(jīng)元細胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣 ，95%； CO2 ， 5%
細胞簡介 |
神經(jīng)元 ，又稱神經(jīng)細胞 ，是構(gòu)成神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。 神經(jīng)元是具有長突觸 (軸突) 的細胞 ，它由細胞體和細胞突起構(gòu)成。在長的軸突 上套有一層鞘 ，組成神經(jīng)纖維 ，它的末端的細小分支叫做神經(jīng)末梢。細胞體位于 腦、脊髓和神經(jīng)節(jié)中 ，細胞突起可延伸至全身各器官和組織中。 |
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈不規(guī)則細胞，在技術(shù)部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
兔食管上皮細胞
大鼠膀胱上皮細胞
大鼠腦血管周細胞
兔星形膠質(zhì)細胞
小鼠鼓膜上皮細胞
兔子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞
大鼠原代舌表皮細胞
大鼠原代小腸成纖維細胞
大鼠原代骨髓巨噬細胞
小鼠口腔黏膜上皮細胞
兔冠狀動脈平滑肌細胞
大鼠主動脈弓內(nèi)皮細胞
人外周血樹突狀細胞(成熟DC細胞)
兔甲狀腺成纖維細胞
小鼠皮膚成纖維細胞
短短芽孢桿菌Brevibacillusbrevis
蠟狀芽孢桿菌Bacilluscereus
放射型根瘤菌Rhizobiumradiobacter
抗輻射不動桿菌Acinetobacterradioresistens
無乳鏈球菌Streptococcusagalactia
金黃萄球菌亞種黃球菌Staphylococcus aureus subsp.aureus Rosenbach
短乳桿菌Lactobacillusbrevis
腸膜明串珠菌Leuconostocmesenteroides
哈維氏弧菌Vibrioharvey
熒光假單胞菌Pseudomonasfluorescens
大鼠腦皮層神經(jīng)元細胞產(chǎn)酸克雷伯氏菌Klebsiellaoxytoc
枯草芽孢桿菌BacillusSubtilis(Ehrenberg)Cohn
檸檬泛菌Pantoeacitrea
鼠傷門氏菌Salmonellaentericasubsp
短小芽孢桿菌Bacilluspumilu
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