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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X2230 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 骨 | 種屬來源 | 兔 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 橢圓形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞 |
詳細(xì)介紹
一、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 兔骨細(xì)胞 | 商品貨號 | A01X2138 |
組織來源 | 骨 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 兔 | 傳代特性 | 根據(jù)細(xì)胞特性 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 橢圓形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代成骨細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞簡介 |
骨細(xì)胞是成熟骨組織中的主要細(xì)胞，相當(dāng)于人的成年期，由骨母細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來。當(dāng)新骨基質(zhì)鈣化后，細(xì)胞被包埋在其中。此時細(xì)胞的合成活動停止，胞漿減少，成為骨細(xì)胞。 骨細(xì)胞能產(chǎn)生新的基質(zhì)，改變晶體液，使骨組織鈣、磷沉積和釋放處于穩(wěn)定狀態(tài)，以維持血鈣平衡。骨細(xì)胞對骨吸收和骨形成都起作用，是維持成熟骨新陳代謝的主要細(xì)胞。骨細(xì)胞夾在相鄰兩層骨板間或分散排列于骨板內(nèi)。相鄰骨細(xì)胞的突起之間有縫隙連接。 |
原代細(xì)胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈橢圓形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞；Jurkat,CloneE6-1
小鼠T淋巴細(xì)胞；CTLL-2[CTLL2]
人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞；J-111
人喉癌上皮細(xì)胞；Hep-2
人肺細(xì)胞；HLF-a
人宮頸癌細(xì)胞；HeLa
人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞；Daudi
人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞；THP-1
人肝癌細(xì)胞；Hep-3B2.1-7
非何杰金氏淋巴瘤細(xì)胞；Wien133
人急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞；JurkatCA
人黑色素瘤細(xì)胞；M21
人外周血B淋巴細(xì)胞；IM-9
人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞；NK-92MI[NK92MI]
人肝腹水腺癌細(xì)胞；SK-HEP-1
共生梭菌Clostridium symbiosum
構(gòu)巢曲霉Aspergillus nidulans (Eidam) Winter
古氏副擬桿菌Parabacteroides goldsteinii
冠突散囊菌Eurotium cristatum
哈茨木霉Trichoderma harzianum
海分枝桿菌Mycobacterium marinum
海氏腸球菌Enterococcus hirae Farrow and Collins
海氏腸球菌定量菌株Quantitative strains of Enterococcus hirae
褐球固氮菌Azotobacter chroococcum Beijerinck
黑曲霉定量菌株Quantitative strains of aspergillus niger
兔骨細(xì)胞紅曲霉Monascus purpureus Went
紅色毛癬菌Trichophyton rubrum
黃孢原毛平革菌Phanerochaete chrysosporium
灰黃青霉Penicillium grisofulvum Dierckx
灰葡萄孢Botrytis cinerea
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