商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義 半胱氨酰亞砜裂解酶(CSL)廣泛存在于百合科蔥屬(如大蒜和洋蔥),十字花科蕓薹屬 (如卷心菜,菜花,西蘭花),以及豆科中的合金歡屬中,并通常被稱為蒜氨酸酶(Alliinase)。香菇酸在γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶和半胱氨酸亞砜裂解酶的作用下轉(zhuǎn)化成香菇精,以及產(chǎn)生丙酮酸、乙醛、甲醛和NH3。CSL是內(nèi)源性甲醛生成的關(guān)鍵酶之一,測(cè)定CSL活性對(duì)于研究食品安全具有重要意義。 測(cè)定原理 CSL催化S-甲基-L-半胱氨酸亞砜反應(yīng)產(chǎn)生丙酮酸,與2,4-二硝ji苯肼反應(yīng),在堿性條件下顯棕紅色,在510nm下有特征吸收峰。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、研缽、離心機(jī)、分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4。△A測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
化琥珀酰(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Amidopyrine/aminopyrine1號(hào)染色體開放閱讀框229抗體包裝1g
化(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Angiotensin II殺菌肽/天蠶抗菌肽抗體包裝25g
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Vitamin D3Cullin 4a蛋白抗體包裝5g
化乙酰(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Pazopanib HCl角蛋白3抗體包裝250mg
解磷定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tiotropium bromide anhydrous 5號(hào)染色體開放閱讀框52抗體包裝10mg
雷他定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Formoterol fumarate 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白85B抗體包裝50mg
霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Formoterol fumarate 緊密連接蛋白14抗體包裝1g
霉二物(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Faropenem sodium人巨病單克抗體包裝100g
扎(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Faropenem sodium癌胚抗原抗體包裝25g
諾昔康(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Orlistat(synthesis)表面趨化因子受體3抗體包裝500g
普噻噸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Rifamycin sodium salt1號(hào)染色體開放閱讀框33抗體包裝1g
羥吡啶;吡多(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Octreotide acetate磷化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CEBP α 抗體包裝5g
屈膦二鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: (S)-(+)-2-Amino-1-butanol 磷化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CEBP β抗體包裝100ml
噻(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: trans-D-erythro-sphingosine磷化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CEBP β抗體包裝25ml
噻(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: ribophytosphingosine hydrochloride磷化整合β2/Integrin β2抗體包裝1g
40595=ATCC15722,CBS785.72,IMRU3751,ISP5595,JCM3045,JCM4805,RIA1445資源名稱: 橄欖色菌核鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:>98,BR外基質(zhì)磷糖蛋白試劑盒褪黑;Melatonine
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR色P450c21B/21-羥化試劑盒通關(guān)藤苷H;Tenacissoside
AS2.1182資源名稱: 克魯斯假絲酵母 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品色P450c21A/21-羥化試劑盒脫內(nèi)酯琥珀半酯;Dehydro
半胱氨酰亞砜裂解酶(CSL)測(cè)試盒50管/24樣綠色木霉 苯硫基乙酸胃癌抗原MG7Elisa
擴(kuò)展青霉 3-(2-吡啶基氨基)酸乙酯IElisa
姬菇 1-苯基氨基脲IIIElisa
2--3-氟IVElisa
衛(wèi)矛 3-(4-溴苯基)-9-苯基-9H-咔唑VElisa
枯草芽孢桿 2-甲氧基-3-溴-5-吡啶ⅦElisa
黃海鞘氨盒 氧化異佛爾酮ⅧElisa
香菇 3-甲基-2-苯基吡啶ⅨElisa
伯頓絲孢畢赤酵母 L-3-環(huán)基ⅪElisa
巴斯德畢赤酵母 3--5-甲氧基苯XIIElisa
費(fèi)氏中華根瘤 3-溴芐ⅡElisa
澳型核果褐腐病 Fmoc-L-苯甘2,3-雙加氧1Elisa
鞘氨單胞 N,N'-二芐基-1,3-二鈣結(jié)合蛋白B1Elisa
銀杏盤多毛孢 2,3-二磷脂A2Elisa
pESC-Ura 4'-甲氧基-2-苯基苯乙酮elabelaElisa