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詳細(xì)介紹
試劑的組成和配制：
酸性提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；堿性提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；試劑一：液體10 mL×1瓶，4℃保存；試劑二：液體3 mL×1瓶，4℃保存；試劑三：粉劑×1瓶，-20 ℃保存，用時(shí)加入3mL蒸餾水，混勻，用不完的試劑4℃保存一周；試劑四：粉劑×1瓶，4 ℃保存，用時(shí)加入3mL蒸餾水，混勻，用不完的試劑4℃保存一周；試劑五：液體3.6mL×1瓶，4 ℃保存；試劑六：液體30mL×1瓶，4 ℃保存；試劑七：液體50mL×1瓶，4 ℃保存。
自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
商品介紹：
測(cè)定意義HK（EC 2.7.1.1）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是葡萄糖分解過(guò)程中的第一個(gè)關(guān)鍵酶，催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點(diǎn)。測(cè)定原理HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰。需自備的儀器和用品紫外分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
商品屬性：
產(chǎn)品名稱 | |
檢測(cè)方法 | 紫外分光光度法 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50管/48樣 |
產(chǎn)品貨號(hào) | AS6321159 |
NAD+和NADH的提取：
1、血清（漿）中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{）體積（ml）：酸性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建 議取約0.1ml血清（漿），加入1ml酸性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）； 冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl堿性提取液使之中 和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{）體積（ml）：堿性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建 議取約0.1ml血清（漿），加入1ml堿性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）； 冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中 和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量（g）：酸性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建議取約0.1g 組織，加入1ml酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴 中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。 NADH的提取：按照組織質(zhì)量（g）：堿性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建議取約0.1g 組織，加入1ml堿性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴 中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和， 混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：酸性 提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液）， 超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），95℃水浴5min （蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加 入500μl堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。 NADH的提取：先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：堿 性提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液）， 超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），95℃水浴5min （蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加 入500μl酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化，分別記錄15s和75s時(shí)吸光值，分別記為A1和A2?！鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化，分別記錄15s和75s時(shí)吸光值，分別記為A3和A4?！鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意：空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
葛根-6''-O-木糖苷英文名： Basic Fuchsin促卵泡激抗體包裝1g
葛根芹菜糖苷英文名： Bromothymol blue神經(jīng)元核抗原抗體包裝5g
蛤蚧（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Bismuthiol IIFAM135B蛋白抗體包裝1g
油（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Bismuthiol II“衰老關(guān)鍵蛋白"抗體包裝5g
隔山消（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Beryllon II促卵泡激受體抗體包裝25g
根皮苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Bromopyrogallol red成纖維生長(zhǎng)因子12抗體包裝5g
根皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Basic Fuchsin成纖維生長(zhǎng)因子14抗體包裝100ml
功勞木（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Brilliant Yellow腦型脂肪結(jié)合蛋白抗體包裝25ml
鉤藤(鉤藤)（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Congo redFAM96B蛋白抗體包裝5ml
鉤藤堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Calconcarboxylic acid腦胚胎鋅指樣蛋白1抗體包裝1g
鉤吻（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Calconcarboxylic acidFAM29蛋白抗體包裝25g
鉤吻子（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Chlorophenol redMaFF相關(guān)蛋白抗體包裝5g
狗脊（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Calmagite7抗體包裝100g
枸杞子（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： CadionFEM1B抗體包裝25g
枸櫞血根堿英文名： Cupferron纖維母生長(zhǎng)因子3抗體包裝5g
黑曲霉Aspergillus│niger var. niger Tiegh. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品狀瘤病抗體試劑盒千金藤;Cepharanthine
螺卷毛殼Chaetomium│cochliodes 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR狀瘤病抗體試劑盒秦皮乙;Esculetin
乳乳球菌乳亞種Lactococcus│lactis subsp. lactis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品狀瘤病18型衣殼蛋白L1試劑盒秦皮;Fraxetin
己糖激酶（HK）測(cè)試盒50管/48樣玉蜀黍平臍蠕孢* Tolcapone類粘蛋白1Elisa
缺陷短波單胞 RKI-1447SPARC相關(guān)模塊化鈣結(jié)合蛋白1Elisa
微黃色芽孢桿 Safinamide梅迪-維斯納病Elisa
尖孢鐮孢 Brain Natriuretic Peptide-32 rat鐵結(jié)合蛋白Elisa
雞傷寒沙門氏 MG-132去酰氨基麥溶蛋白抗體Elisa
腐皮鐮刀(都只確定鐮刀屬) KPT-185N鈣粘著蛋白;上皮性鈣黏附蛋白Elisa
葉居 GF109203X色氧化2C9Elisa
釀酒酵母 Blonanserin色P4503AElisa
釀酒酵母 Rocilinostat (ACY-1215)蛋白酪磷酸KElisa
冷纖維單胞 β-淀粉狀蛋白25-35角蛋白78Elisa
根瘤 Amyloid β Protein Fragment 1-40Toll樣受體3Elisa
盤長(zhǎng)孢狀盤孢 H 89 2HCl牙齦蛋白KElisa
三葉草根瘤 Entacapone色P450氧化還原Elisa
釀酒酵母 鹽酸多佐β葡聚糖Elisa
樺剝管 Y-27632 dihydrochloride硫酸軟骨846Elisa
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