詳細介紹
產品分類:酶抑制劑
儲存條件:—20℃,12個月
用途:用于動物細胞或組織蛋白的提取,能zui大程度地保持蛋白質磷酸化,常用于動物細胞或組織中蛋白激酶活性和信號傳導的研究。
注意事項:為多種磷酸酶抑制劑混合液,可有效抑制酪氨酸磷酸酶、絲氨酸磷酸酶、蘇氨酸磷酸酶、酸性和堿性磷酸酶等各種磷酸酶。
公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
磷酸酶抑制劑 | 10ml | FS-R7523 |
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預處理:稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數按腦計算應不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現,至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據細胞類型,設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(通常是7-10天)內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩(wěn)定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉染細胞的篩選
1) 轉染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
林生蠟蘑磷化Rad51抗體Anti-EDA Antibody2(PRM2)
具核梭桿菌聚核亞種磷化成骨特異性轉錄因子抗體Anti-EDA Antibody釉原蛋白Y-連鎖(AMELY)
毛木耳(臺耳)磷化G蛋白信號轉導調節(jié)因子19抗體Anti-EDNRB Antibody釉原蛋白X-連鎖(AMELX)
藤倉鐮孢G蛋白信號轉導調節(jié)因子19抗體Anti-EDNRB Antibody(PB0585)釉成熟蛋白(AMTN)
枯草芽孢桿菌環(huán)指蛋白1抗體Anti-EED Antibody誘導型一氧化氮合(NOS2)
糞腸球菌原癌基因c-Met相關酪激抗體Anti-EEA1 Antibody有機溶質載體伴侶1(OSCP1)
尿八疊球菌磷化原癌基因c-Met相關酪激抗體Anti-EGF Antibody游離脂肪受體1(FFAR1)
類諾氏菌屬腫瘤血管內皮調節(jié)蛋白Robo4抗體Anti-EGF Antibody硬脂酰去飽和(SCD)
馬里斯棒狀桿菌軸突導向受體抗體Anti-EGF Antibody硬纖毛蛋白(STRC)
馬賽菌絡絲蛋白抗體Anti-EGF Antibody應激誘導磷蛋白1(STIP1)
頭花革菌RUSC1抗體Anti-EGFR Antibody營養(yǎng)蛋白(TRO)
枯草芽胞桿菌RUSC2抗體Anti-EGFL6 Antibody隱花色2(CRY2)
釀酒酵母RAGEF2蛋白抗體Anti-EGFR Antibody隱花色1(CRY1)
釀酒酵母G蛋白偶聯受體RAB23抗體Anti-EGFR Antibody乙-N-甲基轉移(INMT)
山茶G蛋白信號調節(jié)因子14抗體Anti-EGFR Antibody陰離子/糖轉運蛋白(AST)
油菜假單胞菌核轉錄因子NF-κB受體/核因子kB受體活化因子抗體Anti-EGFR Antibody易位關聯膜蛋白1(TRAM1)
致病性大腸埃希菌Escherichia│coli 質量規(guī)格:>98%,BR
擬內孢霉Endomycopsis│sp. 質量規(guī)格:>98%,可用于培養(yǎng)
莖點霉Phoma│sp. 質量規(guī)格:>98%,BR
磷酸酶抑制劑ATRN/FITC 熒光su標記吸引suIgG規(guī)格: 0.2ml
ATX/Autotaxin/E-NPP2/FITC 熒光su標記自分泌運動因子IgG規(guī)格: 0.2ml
ATXN1/Ataxin 1/FITC 熒光su標記兔抗人、大、小鼠失調癥蛋白1IgG規(guī)格: 0.2ml
Ataxin-1(phospho Ser776)/FITC 熒光su標記兔抗人、大、小鼠磷suan化失調癥蛋白1IgG規(guī)格: 0.2ml
AU5 tag/FITC 熒光su標記AU5 tag標簽IgG規(guī)格: 0.2ml