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小鼠胸腺成纖維細(xì)胞

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更新時間:2024-01-30 10:18:41瀏覽次數(shù):234

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
貨號 A01X1867 主要用途 僅供科研研究實驗
組織來源 胸腺組織 種屬來源 小鼠
生長特性 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 長梭形細(xì)胞
小鼠胸腺成纖維細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品:人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞Bacillus altitudinis高地芽孢桿菌人胚肺成纖維樣細(xì)胞(男)Micrococcus antarcticus南極微球菌人胚肺成纖維細(xì)胞(女)Bacillus idriensis病研所芽孢桿菌人胚皮膚成纖維細(xì)胞Bacillus indicus印度芽孢桿菌

詳細(xì)介紹

一、細(xì)胞基本屬性:

細(xì)胞名稱

小鼠胸腺成纖維細(xì)胞

商品貨號

A01X1867

組織來源

胸腺組織

產(chǎn)品規(guī)格

5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

種屬來源

小鼠

傳代特性

根據(jù)細(xì)胞特性

生長特性

貼壁

細(xì)胞形態(tài)

長梭形細(xì)胞

1.jpg

5.jpg


細(xì)胞簡介

胸腺是機體重要的淋巴器官。其功能與免疫緊密相關(guān),是T細(xì)胞分化、發(fā)育、成熟的場所,還可以分泌胸腺激素及激素類物質(zhì),具有內(nèi)分泌技能的器官。胸腺的表面有結(jié)締組織被膜,結(jié)締組織伸入胸腺實質(zhì)把胸腺分成許多不wan全分隔的小葉,這些結(jié)締組織組織是由成纖維細(xì)胞構(gòu)成,其作為支持細(xì)胞,對其他細(xì)胞起保護(hù)和支持作用。

包被條件: 

培養(yǎng)基:原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系

換液頻率:每2-3天換液一次

傳代比例:

消化液:0.25%胰蛋bai酶

培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%

QQ截圖20240123162116.png
原代細(xì)胞實驗步驟:

一、取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。

二、在超凈工作臺中,將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中,打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中,去除小腦和間腦。

三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。

四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜,保留大腦皮質(zhì)。

五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中,剪碎成約1mm3大小,放入50ml的離心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型膠原酶,0 .025-0 .05%IV型膠原酶,200-400U DNaseI),混勻后37℃水浴消化1-1.5h。

六、室溫1 000×g離心8min,去上清液。

七、沉淀中加入20%BSA重懸浮,充分混勻,1 000×g,20min,4℃離心,去上清。

八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的膠原酶/分散酶,0.05-0.1%I型膠原酶,100-300U DNaseI )重懸浮,混勻,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室溫離心6min,去上清液。

九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻,鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃離心10min。

十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段,吸出后DMEM

漂洗兩次(離心1000×rpm,6min,室溫),去上清液。

加入DMEM培養(yǎng)液(20%FBS,4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮,接種于含5%的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基,隨后隔天換液。

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甲型流感病毒H3亞型(IAV-H3)核檢測試劑盒(熒光PCR法)

原代細(xì)胞使用方法:

是一種貼壁細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈長梭形細(xì)胞,在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,細(xì)胞可傳2-3代;建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗。

客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml培養(yǎng)基終止消化;

3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);

4)待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞收貨脫落

1)收集所有細(xì)胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀;

2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min);消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化;

3)經(jīng)1000rpm,離心5min,丟棄上清,用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi);

4)待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。

5)原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。

4. 細(xì)胞實驗

因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進(jìn)行包被,以增強細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗;包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。


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