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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1892 | 主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
| 組織來(lái)源 | 正常骨組織 | 種屬來(lái)源 | 小鼠 |
| 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 橢圓形，不規(guī)則細(xì)胞 |
詳細(xì)介紹
一、細(xì)胞基本屬性：
細(xì)胞名稱 | 小鼠骨細(xì)胞 | 商品貨號(hào) | A01X1892 |
組織來(lái)源 | 正常骨組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來(lái)源 | 小鼠 | 傳代特性 | 根據(jù)細(xì)胞特性 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 橢圓形，不規(guī)則細(xì)胞 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代成骨細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞簡(jiǎn)介 |
骨細(xì)胞是成熟骨組織中的主要細(xì)胞，相當(dāng)于人的成年期，由骨母細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來(lái)。當(dāng)新骨基質(zhì)鈣化后，細(xì)胞被包埋在其中。此時(shí)細(xì)胞的合成活動(dòng)停止，胞漿減少，成為骨細(xì)胞。骨細(xì)胞能產(chǎn)生新的基質(zhì)，改變晶體液，使骨組織鈣、磷沉積和釋放處于穩(wěn)定狀態(tài)，以維持血鈣平衡。骨細(xì)胞對(duì)骨吸收和骨形成都起作用，是維持成熟骨新陳代謝的主要細(xì)胞。骨細(xì)胞夾在相鄰兩層骨板間或分散排列于骨板內(nèi)。相鄰骨細(xì)胞的突起之間有縫隙連接。 |
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細(xì)胞使用方法：
是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈橢圓形，不規(guī)則細(xì)胞，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
雜交瘤細(xì)胞株；CarpIgM
CHO細(xì)胞株；CHOK1-R-ng-D3G6C11
雜交瘤細(xì)胞株；A4-6A2
雜交瘤細(xì)胞株；MXRA7
雜交瘤細(xì)胞株；A4-1B1
人直腸癌細(xì)胞；HRC-6
人直腸癌細(xì)胞；HRC-8
人直腸癌細(xì)胞；HRC-11
雜交瘤細(xì)胞株；C11-6F7
人直腸癌細(xì)胞；HRC-13
人結(jié)腸癌細(xì)胞；CBZ
狗腎細(xì)胞；MDCK-6A8
狗腎細(xì)胞；MDCK-15D3
雜交瘤細(xì)胞株；9E
雜交瘤細(xì)胞株；1D7
平板計(jì)數(shù)瓊脂（PCA）顆粒
營(yíng)養(yǎng)肉湯（NB）顆粒
營(yíng)養(yǎng)瓊脂（NA）顆粒
緩沖蛋白胨水(BPW)顆粒
液體硫乙醇鹽培養(yǎng)基顆粒
硫乙醇鹽流體培養(yǎng)基顆粒
改良馬丁培養(yǎng)基顆粒
改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基顆粒
玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基顆粒
胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）顆粒
小鼠骨細(xì)胞%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基顆粒
胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）顆粒
大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）顆粒
沙氏萄糖液體培養(yǎng)基顆粒
沙氏萄糖瓊脂培養(yǎng)基顆粒
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