改良精子冷凍保護(hù)劑公司正在銷售的產(chǎn)品：豚鼠集蛋白亞家族成員11(COLEC11)試劑盒 Anti-ITGA1 Antibody甲狀腺受體相關(guān)蛋白220抗體
豚鼠α1連接素(CTNNα1)試劑盒Anti-ITGA2B Antibody磷酸化甲狀腺受體相關(guān)蛋白220抗體
豚鼠促生長(zhǎng)(GH)試劑盒Anti-ITGA1 Antibody抑癌基因5抗體
豚鼠α-骨膠原交聯(lián)(α-CTx)試劑盒Anti-ITG

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

產(chǎn)品分類：細(xì)胞其他

儲(chǔ)存條件： -20℃,3個(gè)月

用途：又名Tyrod-葡萄糖冷凍保護(hù)劑，用于精子的冷凍保護(hù),減少因冷凍造成精子的死亡。精子冷凍保護(hù)劑的一種，不含卵黃。主要用于少精子癥標(biāo)本和手術(shù)取精的冷凍方案。

注意事項(xiàng)：無(wú)菌溶液。含有葡萄糖、甘油、人血清白蛋白、Tyrode溶液，無(wú)卵黃等。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

酰次烏頭原堿（標(biāo)準(zhǔn)品） Myokinase癌基因ERG3抗體包裝1g

酰基戈米辛O Phosphodiesterase II from Bovine Spleen豬源產(chǎn)腸性大腸桿菌K88-K99抗體包裝25g

酰芍藥苷(標(biāo)準(zhǔn)品) SuccinimideFAS凋亡抑制分子3抗體包裝5g

酰烏頭原堿（標(biāo)準(zhǔn)品） 5-Bromouridine纖維束1抗體包裝25g

酰新烏頭原堿（標(biāo)準(zhǔn)品） ADA buffer, disodium salt叉頭蛋白P3抗體包裝5g

酰氧化芍藥苷 Albumin, from bovine Protease free免疫球蛋白G Fc段受體I包裝1g

比靈,右旋荷包牡丹堿（標(biāo)準(zhǔn)品） Aluminum stearate叉頭蛋白M1抗體包裝5g

蓽茇（標(biāo)準(zhǔn)品） Bismuth(III) nitrate pentahydrate磷化雷帕霉靶蛋白抗體包裝500ml

蓽澄茄（標(biāo)準(zhǔn)品） Calcium phosphate, dibasic, dihydrate磷化粘著斑激抗體包裝100ml

蓖麻子（標(biāo)準(zhǔn)品） Cerium(III) carbonate, hydrate絲聚合蛋白/中間絲蛋白抗體包裝25ml

蝙蝠葛堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Chymotrypsinogen A肺鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體（C端）包裝10g

蝙蝠葛諾林堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Cibacron blue 3G-A13抗體(纖維蛋白穩(wěn)定因子)包裝50g

蝙蝠葛蘇林堿(標(biāo)準(zhǔn)品) DEAE Dextran濾泡樹(shù)突分泌蛋白抗體包裝25g

扁柏雙黃(標(biāo)準(zhǔn)品) Fluridone纖維母生長(zhǎng)因子13抗體包裝5g

扁桃苷/苦杏仁苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Histamine骨骼肌肌球蛋白輕鏈2抗體包裝100g

淺灰鏈霉菌Streptomyces│griseolus 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR瘦試劑盒染料木;Genistein

白乳菇Lactarius│piperatus (L.) Pers. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品受體型酪蛋白磷樣N試劑盒;

鴨瘟病毒Alphaherpesvirinae│Duck plague virus 質(zhì)量規(guī)格：≥99.0%受體TNFRSF結(jié)合絲蘇激2試劑盒 IIb;Escin IIb
改良精子冷凍保護(hù)劑TGF- Beta3/FITC  熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β3IgG

TGF- BetaR1/ALK /FITC  熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β受體1IgG

TGF- BetaR 2/FITC  熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β受體2IgG

TGF- BetaR 3/FITC  熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子–β受體3IgG

TGM3/FITC  熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)谷氨酰3IgG

Thioredoxin 1/FITC  熒光標(biāo)記硫氧還蛋白IgG

Thymosin Alpha-1/FITC  熒光標(biāo)記 α-1IgG

Tie1/FITC  熒光標(biāo)記血管生成-1受體IgG

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。