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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1332 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 輸尿管組織 | 種屬來源 | 人 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 上皮樣，多角形細胞 |
詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 人輸尿管上皮細胞 | 商品貨號 | A01X1332 |
組織來源 | 輸尿管組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 人 | 傳代特性 | 細胞特性確定傳代 |
生長特性 | 貼壁培養(yǎng) | 細胞形態(tài) | 上皮樣，多角形細胞 |
細胞簡介 |
輸尿管上接腎盂，下連膀胱，是一對細長的管道， 呈扁圓柱狀，管徑平均為0.5- 0.7厘米。成人輸尿管全長25-35厘米， 位于腹膜后，沿腰大肌內(nèi)側(cè)的前方垂直下 降進入骨盆。輸尿管管壁為三層組織所構(gòu)成。外系筋膜組織，包圍著整個腎盂 和輸尿管， 其中有豐富的血管和神經(jīng)纖維；中間為三層肌肉， 其內(nèi)外層為縱行肌 ，中層為環(huán)形肌；里為粘膜層，與腎盂及膀胱粘膜是連貫的。粘膜下層有豐富 的網(wǎng)狀淋巴管， 是腎臟向下、膀胱向上感染的途徑之一。 輸尿管的生理功能是將 尿液從腎盂排入膀胱。尿液在輸尿管內(nèi)的運送不是被動的過程 ,而是通過輸尿管蠕 動方式主動地進行。輸尿管有較厚的平滑肌層．可作節(jié)律性的蠕動，使尿液不斷 地流入膀胱。因此對輸尿管平滑肌運動的研究，是尿動力學(xué)的重要研究方向。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代平滑肌細胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相： 空氣，95%；CO2 ，5%
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人肺鱗癌細胞，NCI-H520細胞
人肺鱗癌細胞，NCI-H1703細胞
人肺鱗癌細胞，SK-MES-1細胞
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都柏林沙門氏菌Salmonella dublin
杜氏炭疽病菌Colletotrichum dematium (Persoon : Fries) Grove
短柄帚霉Scopulariopsis breuicaulis
短刺小克銀漢霉Cunninghamella blakesleeana
短短芽孢桿菌Brevibacillus brevis
短乳桿菌Lactobacillus brevis
短穩(wěn)桿菌Empedobacter brevis
短小芽孢桿菌Bacillus pumilus
短帚霉Leucosporidium scottii
鈍齒棒桿菌Corynebacterium crenatum
人輸尿管上皮細胞鈍型馬拉色菌Malassezia obtusa
多黏類芽孢桿菌Paenibacillus polymyxa
多殺性巴氏桿菌Pasteurella multocida subsp.‖multocida (Lehmann and Neumann) Rosenbusch and Merchant
多食鞘氨醇桿菌Sphingobacterium multivorum
多氏居海事城球桿菌Phocaeicola dorei
原代細胞使用方法：
是一種貼壁培養(yǎng)細胞，細胞形態(tài)呈上皮樣，多角形細胞，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
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