培養(yǎng)板一般為一次性使用,尤其在接觸了有毒、有害等物質(zhì)后更應(yīng)該處理后丟棄。但如果要反復(fù)使用則一定要進行正確的清洗和消毒,以保證細胞培養(yǎng)的效果。
問:只有紫外照射可以保證無菌嗎?可不可以從清洗方面做點工作?
答:看你什么用途了,一般貼壁生長的細胞用重復(fù)利用的培養(yǎng)板效果不是很好,因為培養(yǎng)板表層在生產(chǎn)時涂有一層促進細胞貼壁的物質(zhì),在清洗后多半會失去。懸浮或是半懸浮生長的細胞還可以。
我們一般是先泡酸過夜,清洗干凈,三蒸水清洗,再用*浸泡清洗,再在工作臺里用無菌水過一遍,在蓋上蓋子在烘箱里烤干,待烤干后,打開在超凈工作臺里近紫外(距離紫外燈<20cm)照射半個小時以上,效果很好,沒有污染過。
其實不管老板有錢沒錢,我們做實驗室尤其是預(yù)實驗或是摸條件時,我們一般都能省就省了,留點錢還不如買點好試劑呢:)
我們一般是先清洗干凈,泡酸過夜,三蒸水清洗,在蓋上蓋子在烘箱里烤干,待烤干后,有兩種選擇:1、在超凈臺里近紫外燈(距離紫外燈<30cm)照射半個小時以上,六孔板一般半個小時,24孔板一個小時,96孔板時間更長,效果很好,沒有污染過;2、到放射科照Co60,照完了盡快用。
我們這里腫瘤細胞耐性很好,所以重復(fù)利用沒什么問題,如果原代培養(yǎng)比較嬌貴的細胞用新板子,也不是很貴。
我們的經(jīng)驗是:清洗后用消毒液浸泡,泡酸過夜,自來水反復(fù)沖洗,雙蒸水沖洗三遍,無塵環(huán)境晾干,用之前紫外燈照射半小時以上,效果很好。我們現(xiàn)在的窮同仁一直在應(yīng)用。
*了也會變黃,因此如果做mtt或比色時是不能用的,在不熟悉細胞培養(yǎng)的時候可以先學(xué)學(xué)細胞記數(shù),熟練了用新的,不過腫瘤細胞可以在舊板子上長得很好喲,原代的細胞比較難養(yǎng),塑料的較好。
紫外的穿透能力很弱,板子紫外照射時是否將蓋子翻過來一起照射那?還有,細胞瓶紫外效果如何?
板子泡酸后和瓶子一樣的清洗方法清洗后,60度烤干,然后放在工作臺里(打開蓋子)用紫外線照射半小時以上,一小時或兩小時,蓋子同時反過來照。瓶子照射沒有效果,要用其他方法
同意樓上大家的意見。96孔和24孔板子在做完了后要先泡清洗計,在用棉花搽洗每個孔,這樣有些貼壁細胞才不會有細胞碎片的殘留,在做mtt是很重要,要不很不準(zhǔn)的。后面就是沖洗,泡酸,3蒸水洗,紫外照射30-60分鐘,不要時間太長,這樣板子容易變色!但是如果是做MTT還是建議用新板子!舊板子做,結(jié)果不準(zhǔn)!
泡酸時不要用剛配好的濃酸,因為那樣會把培養(yǎng)板表面促進細胞貼附的一層膜腐蝕掉,細胞就無法貼壁了。用酸泡完后用自來水清洗,再用蒸餾水清洗3-5次,然后泡在75%的酒精里(酒精用純的無水乙醇),用前在紫外線下照射1h。基本可保證95%以上無菌,用這些板做做預(yù)實驗是沒問題的。
1.鈷60照射適合大量的板同時滅菌,攢一箱,再送去滅菌。
2.紫外消毒適合少量的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板,比如培養(yǎng)板,將蓋打開,翻過來,連同板一起在紫外下照射2小時即可,事先不用酒精泡。