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供貨周期	一個月	應(yīng)用領(lǐng)域	化工,生物產(chǎn)業(yè)

人生長激素釋放肽ghrelin試劑盒

人生長激素釋放肽ghrelin試劑盒，常基于酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），以雙抗體夾心法為原理。其核心在于用純化的 ghrelin 抗體包被微孔板，制成固相抗體。當(dāng)加入樣本后，樣本中的 ghrelin 會與固相抗體特異性結(jié)合，接著加入 HRP 標(biāo)記的 ghrelin 抗體，形成抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。添加底物 TMB，在 HRP 酶的催化下，TMB 轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，遇酸變?yōu)辄S色，顏色深淺與 ghrelin 含量正相關(guān)，借助酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測定吸光度（OD 值），依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線就能精準(zhǔn)計(jì)算出樣本中 ghrelin 的濃度。

試劑盒通常包含酶聯(lián)板、標(biāo)準(zhǔn)品（多為凍干品，使用時需以樣品稀釋液溶解并稀釋）、樣品稀釋液、檢測稀釋液 A、檢測稀釋液 B、檢測溶液 A、檢測溶液 B、底物溶液、濃洗滌液（使用時需按比例稀釋）、終止液、覆膜及詳細(xì)的使用說明書。

對樣本類型要求較為寬泛，血清樣本需全血室溫放置 2 小時或 4℃過夜后，1000×g 離心 20 分鐘取上清；血漿可用 EDTA 或肝素抗凝，采集后 30 分鐘內(nèi)，1000×g 離心 15 分鐘取上清；組織勻漿需先以預(yù)冷 PBS 沖洗組織，去除殘留血液，剪碎后按比例加入 PBS 研磨，再 5000×g 離心 5 - 10 分鐘取上清；細(xì)胞培養(yǎng)上清則以 1000×g 離心 20 分鐘除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。其它生物樣本一般 1000×g 離心 20 分鐘取上清。標(biāo)本置 4℃保存應(yīng)小于 1 周， - 20℃或 - 80℃均應(yīng)密封保存，且要避免反復(fù)凍融，溶血標(biāo)本不宜用于檢測。

操作時，先將試劑盒及樣本平衡至室溫。加樣環(huán)節(jié)，設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔，空白孔加樣品稀釋液，其余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品，輕輕混勻后 37℃反應(yīng) 120 分鐘。之后棄去液體，每孔加檢測溶液 A 工作液，37℃反應(yīng) 60 分鐘，洗板 3 次。接著加檢測溶液 B 工作液，37℃反應(yīng) 60 分鐘，再洗板 5 次。隨后加入底物溶液，37℃避光顯色，在顏色呈現(xiàn)明顯梯度時加入終止液，此時藍(lán)色迅速轉(zhuǎn)為黃色。最后在加終止液后立即用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測量各孔 OD 值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中 ghrelin 濃度。

該試劑盒主要應(yīng)用于科研領(lǐng)域，助力研究人員探究 ghrelin 與肥胖、糖尿病、心血管疾病等多種生理病理狀態(tài)的關(guān)聯(lián)，也能作為評估特定干預(yù)措施對 ghrelin 水平影響的有效工具。

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