TC-100培養(yǎng)基是一種專為昆蟲細(xì)胞設(shè)計的合成培養(yǎng)基，廣泛應(yīng)用于草地貪夜蛾（SF9/SF21）細(xì)胞培養(yǎng)及桿狀病毒生產(chǎn)。以下是其標(biāo)準(zhǔn)使用步驟：
一、培養(yǎng)基準(zhǔn)備
儲存條件
未開封的TC-100培養(yǎng)基需儲存于2℃~8℃，有效期為9~12個月（具體以產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)）。
避免反復(fù)凍融，開封后建議分裝密封保存。
復(fù)溫與溶解
使用前需將培養(yǎng)基從冰箱取出，置于室溫（20℃~25℃）或28℃水浴中緩慢復(fù)溫，避免直接加熱。
若培養(yǎng)基為干粉形式，需按說明書比例加入超純水溶解，并使用0.22μm濾膜過濾除菌。
二、細(xì)胞復(fù)蘇
凍存管處理
將含有細(xì)胞懸液的凍存管迅速置于37℃水浴中，1分鐘內(nèi)解凍。
解凍后用70%乙醇擦拭管壁消毒，轉(zhuǎn)移至無菌操作臺。
細(xì)胞接種
向凍存管中加入4mL預(yù)熱至28℃的TC-100培養(yǎng)基（含10%胎牛血清，F(xiàn)BS），輕輕吹打混勻。
將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)基至總體積5mL，輕輕搖晃使細(xì)胞分布均勻。
培養(yǎng)條件
培養(yǎng)箱參數(shù)：溫度28℃、濕度≥70%、CO?濃度4.5%~5%（或根據(jù)需求調(diào)整）。
靜置培養(yǎng)4~6小時后，換液以去除殘留DMSO。
三、細(xì)胞傳代
傳代時機(jī)
當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時進(jìn)行傳代，避免細(xì)胞過度生長導(dǎo)致狀態(tài)下降。
消化處理
棄去舊培養(yǎng)基，用PBS清洗1次。
加入1~2mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃消化1~2分鐘，顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓脫落。
終止消化與離心
加入等體積培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打使細(xì)胞分散。
1000rpm離心5分鐘，棄上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
接種與稀釋
按1:2~1:5比例傳代，接種至新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)基至5mL。
四、細(xì)胞凍存
凍存液配制
按90%FBS+10%DMSO比例現(xiàn)用現(xiàn)配，預(yù)冷至4℃。
細(xì)胞處理
消化收集細(xì)胞，離心后用凍存液重懸，調(diào)整細(xì)胞密度為1×10?~1×10?/mL。
分裝至凍存管，每管1mL，標(biāo)注細(xì)胞名稱、代數(shù)及凍存日期。
程序降溫
4℃放置30分鐘→-20℃放置2小時→-80℃過夜→轉(zhuǎn)移至液氮罐長期保存。
五、質(zhì)量控制與注意事項
無菌操作
全程需在無菌操作臺內(nèi)進(jìn)行，使用前需開啟紫外燈照射30分鐘。
培養(yǎng)基pH與滲透壓
培養(yǎng)基pH應(yīng)維持在6.0~6.4，滲透壓320~355 mOsm/kg（具體以產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)）。
支原體檢測
定期對細(xì)胞進(jìn)行支原體檢測，避免污染影響實驗結(jié)果。
細(xì)胞狀態(tài)監(jiān)測
每日觀察細(xì)胞形態(tài)與生長情況，及時處理異常（如污染、凋亡等）。
六、應(yīng)用場景
桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)：支持重組蛋白的高效表達(dá)。
昆蟲細(xì)胞系培養(yǎng)：適用于草地貪夜蛾SF9、SF21等細(xì)胞系。
生物制藥：用于病毒疫苗、抗體藥物的生產(chǎn)與研發(fā)。
通過嚴(yán)格遵循上述步驟，可確保TC-100培養(yǎng)基在昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)中的性能，為后續(xù)實驗提供可靠保障。
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