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光照培養(yǎng)箱多管發(fā)酵具體指哪些?

　1．多管發(fā)酵法

　　

　　初發(fā)酵實(shí)驗(yàn)發(fā)酵管內(nèi)裝有單倍或三倍乳糖蛋白胨培育液，并在內(nèi)倒置有小玻璃管。每個(gè)樣品用三個(gè)不一樣的水樣量接種，同一接種水樣量要有五管，將水樣別離接種到裝有乳糖蛋白胨培育液的發(fā)酵管中，在37℃±0.5℃下培育24h±2h。乳糖能起挑選效果，因?yàn)樵S多細(xì)菌不能發(fā)酵乳糖，而大腸菌群能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣。培育液中參加溴甲酚紫作為酸度指示劑，細(xì)菌產(chǎn)酸后，培育液即由本來(lái)的紫色變成黃色。產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管標(biāo)明實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，如在倒管內(nèi)產(chǎn)氣不顯著，可輕拍發(fā)酵管，有小氣泡升起為陽(yáng)性。

　　

　　復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)細(xì)微振動(dòng)初發(fā)酵實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性成果的發(fā)酵管，用3mm接種環(huán)將培育物(2-3環(huán))轉(zhuǎn)接到EC培育液中，在44.5℃±0.5℃下培育24h±2h(進(jìn)步培育溫度可構(gòu)成不利于來(lái)自自然環(huán)境的大腸菌群的成長(zhǎng))。培育后當(dāng)即調(diào)查，發(fā)酵管產(chǎn)氣則證實(shí)為糞大腸菌群陽(yáng)性。

　　

　　2．濾膜法

　　

　　濾膜是一種微孔性濾膜，孔徑0.45μm。將水樣寫(xiě)入已滅菌的放有濾膜的過(guò)濾器中，經(jīng)過(guò)抽濾，細(xì)菌即被截留在膜上，然后將濾膜貼于M-FC培育基上，在44.5℃±0.5℃下培育24h±2h。糞大腸菌群菌落在M-FC培育基上呈藍(lán)色或藍(lán)綠色，其他非糞大腸菌群菌完工灰色、淡黃色或無(wú)色。正常狀況下，因?yàn)闇囟群兔倒逅猁}試劑的挑選性效果，在M-FC培育基上很少見(jiàn)到非糞大腸菌菌落。

　　

　　二．兩種辦法的注重事項(xiàng)

　　

　　1．培育溫度的需求總大腸菌群中的細(xì)菌除日子在腸道中外，在自然環(huán)境中的水與土壤中也常常存在，但此等在自然環(huán)境中日子的大腸菌群培育的最合適溫度為25℃左右，如在37℃培育則仍可成長(zhǎng)，但如將培育溫度再升高至44．5℃，則不再成長(zhǎng)，而直接來(lái)自糞便的大腸菌群細(xì)菌，習(xí)慣于37℃左右成長(zhǎng)，如將培育溫度升高至44．5℃仍可持續(xù)成長(zhǎng)。因而，可用進(jìn)步培育溫度的辦法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)別，兩種辦法也都依據(jù)此理。將接種好的樣品或裝有濾膜的培育基放入光照培養(yǎng)箱時(shí)，箱內(nèi)溫度必定要到達(dá)所需求的溫度(44.5±0.5℃)時(shí)，方可放入。如用恒溫水浴箱時(shí)，其水面要高于接種物面，放濾膜的培育皿要沉到水浴箱底部。

　　

　　2．加氯水樣的處置經(jīng)氯處置消毒過(guò)的水樣，水中富含必定量的余氯，使大腸菌群處于受損或受按捺狀況，在收集水樣時(shí)應(yīng)提早在采樣瓶中加硫代硫酸鈉，硫代硫酸鈉能夠脫氯，使受損的細(xì)菌得以復(fù)蘇與修正，然后避免呈現(xiàn)計(jì)數(shù)成果偏低乃至假陰性的表象。此外余氯對(duì)濾膜法培育的細(xì)菌其按捺效果尤為顯著，所以抽濾時(shí)應(yīng)對(duì)水樣進(jìn)行許多無(wú)菌水稀釋，以削減余氯的殘留。

　　

　　3．樣品的保管采樣用的容器運(yùn)用前應(yīng)蓋好瓶蓋，用牛皮紙將瓶蓋和瓶頸處包裹好，置枯燥箱160℃-170℃干熱滅菌2h，或用高壓蒸汽滅菌器121℃滅菌15min。采樣后水樣的正確保管也很重要，如保管不妥可使樣品中的大腸菌群細(xì)菌或在必定條件下再成長(zhǎng)，這些都將影響檢測(cè)成果的精確性。檢測(cè)室接到水樣后，應(yīng)當(dāng)即檢測(cè)，如因故不能檢測(cè)時(shí)，應(yīng)當(dāng)即將樣品置于冰箱內(nèi)(2℃-10℃)并于2小時(shí)內(nèi)檢測(cè)。

　　

　　4．培育物質(zhì)的制備與保管

　　

　　⑴.多管發(fā)酵法所運(yùn)用的培育液在分裝于各發(fā)酵管中后，應(yīng)將發(fā)酵管趕快放于高壓蒸汽滅菌器中，在115℃滅菌20min(注重：這個(gè)溫度也應(yīng)操控好，既到達(dá)滅菌的效果，還要避免培育物質(zhì)分化丟失)，然后儲(chǔ)存于冰箱或暗處備用。

　　

　?、?濾膜法所選用的M-FC培育基多運(yùn)用外購(gòu)的制品，培育基中苯胺藍(lán)的純度和質(zhì)量往往影響菌落的色彩，因而，無(wú)菌包裝的成套培育基在運(yùn)用前，*先接種典型糞大腸菌，以調(diào)查比照菌落的色彩，來(lái)判定其穩(wěn)定性。

　　

　　5．成果核算

　　

　?、?多管發(fā)酵法的成果是依據(jù)不一樣接種量的發(fā)酵管所呈現(xiàn)陽(yáng)性成果的數(shù)目，從MPN表中查得相應(yīng)的MPN指數(shù)，來(lái)核算每升水中糞大腸菌群細(xì)菌的MPN值。MPN是“MostProbableNumber"的縮寫(xiě)，指最大能夠數(shù)，它是依據(jù)核算學(xué)理論，估量水體中的菌群密度和清潔質(zhì)量的一種辦法，所以精確判別不一樣接種量發(fā)酵管的陽(yáng)性數(shù)是非常重要的，不然將招致較大差錯(cuò)。

　　

　?、?濾膜法的成果是計(jì)數(shù)濾膜上呈藍(lán)或藍(lán)綠色的菌落，來(lái)核算出每升水樣中的糞大腸菌群數(shù)。所認(rèn)為便于計(jì)數(shù)，削減差錯(cuò)，抱負(fù)的水樣體積是一片濾膜上成長(zhǎng)20-60個(gè)糞大腸菌群菌落。

　　

　　三．在實(shí)踐中的運(yùn)用討論

　　

　　1．檢測(cè)辦法對(duì)樣品的適用性

　　

　?、?多管發(fā)酵法因?yàn)橹恍枨笠罁?jù)水樣的取樣量來(lái)決定將樣品培育于何種培育液中(單倍或是三倍乳糖)進(jìn)行培育，因而理論上可適用于各種水樣，但因?yàn)槭馨l(fā)酵管容積的約束，其更適合檢測(cè)水源水、地表水和污染源廢水(取樣量不大)，并且若是接種的水樣量不是MPN表中的三種接種量時(shí)，還需用公式進(jìn)行換算。

　　

　　⑵.濾膜法首要是選用抽濾設(shè)備將細(xì)菌截留在濾膜上，然后將濾膜貼附在固體培育基上培育，因而可用于檢測(cè)體積較大的水樣，但受濾膜孔徑的約束，在檢測(cè)混濁度高(污染源廢水)、非大腸桿菌類細(xì)菌密度大(河湖水)的水樣時(shí)，對(duì)菌落計(jì)數(shù)核算有必定影響，此外，如水樣中有毒性物質(zhì)較高，也會(huì)在濾膜上構(gòu)成累積，按捺細(xì)菌培育。

　　

　　2．檢測(cè)時(shí)刻及操作進(jìn)程的繁瑣度

　　

　?、?多管發(fā)酵法需求經(jīng)過(guò)初發(fā)酵實(shí)驗(yàn)和復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)兩個(gè)進(jìn)程后才干依據(jù)不一樣接種量的發(fā)酵管所呈現(xiàn)陽(yáng)性成果的數(shù)目，從MPN表中查得相應(yīng)的MPN指數(shù)，然后最終得出每升水中糞大腸菌群細(xì)菌的MPN值。能夠看出，多管發(fā)酵法的培育時(shí)刻至少需求2天以上，且對(duì)接種量、每一接種量的發(fā)酵管數(shù)都有嚴(yán)格需求(MPN表多選用9管、15管發(fā)酵管，接種量為10ml、1ml、0.1ml3種體積查詢)，不然成果難以核算。

　　

　?、?濾膜法當(dāng)前首要選用成套NPS(濾膜 培育基 培育皿)進(jìn)行細(xì)菌截留和培育，操作簡(jiǎn)略，運(yùn)用時(shí)只需用少數(shù)無(wú)菌水潮濕培育基墊即可運(yùn)用，培育時(shí)刻1天左右，能比多管發(fā)酵法更快地取得成果，還具有高度的再現(xiàn)性和精密性。此外因?yàn)檫x用單片無(wú)菌包裝，節(jié)省了滅菌時(shí)刻，還避免操作進(jìn)程中的二次污染，并且長(zhǎng)有菌落的濾膜片可在紫外線滅菌、枯燥后作為檢測(cè)記載永世保管，更契合計(jì)量認(rèn)證規(guī)范。

　　

　　3．檢測(cè)本錢(qián)的思考

　　

　?、?多管發(fā)酵法所用的發(fā)酵管、小玻璃倒管和塑料蓋可在清除、高壓滅菌和紫外線消毒后重復(fù)運(yùn)用，液態(tài)培育基可自行制造或選用市售已配好的歸納培育基，檢測(cè)的本錢(qián)不高。因?yàn)槠滢k法較繁瑣，當(dāng)前正有一種經(jīng)過(guò)USEPA認(rèn)證的水和廢水中糞大腸菌群檢測(cè)的規(guī)范辦法逐漸替代它，這種在美國(guó)、日本和加拿大等國(guó)家廣泛運(yùn)用的檢測(cè)技能在國(guó)內(nèi)也有必定運(yùn)用(北京市環(huán)境檢測(cè)中間、北京市排水集團(tuán)檢測(cè)中間等)，這種辦法就是運(yùn)用IDEXXcolilert試劑來(lái)檢測(cè)水中糞大腸菌，盡管它是依據(jù)多管發(fā)酵法原理，不過(guò)卻將其操作大大簡(jiǎn)化了。當(dāng)然，伴跟著操作的簡(jiǎn)化，檢測(cè)本錢(qián)也大幅進(jìn)步，設(shè)備基本上滿是進(jìn)口的，前期投入大概在8萬(wàn)元至10萬(wàn)元人民幣之間，且因?yàn)椴蓸悠?、試劑和密封?jì)數(shù)盤(pán)都是一次性運(yùn)用，單個(gè)樣品的檢測(cè)本錢(qián)也將到達(dá)200元人民幣左右。

　　

　?、?濾膜法首要選用的抽濾設(shè)備(拋光不銹鋼3歧管過(guò)濾器、500ml漏斗、無(wú)油隔閡真空正壓兩用泵和手動(dòng)無(wú)菌水加液器)也基本上來(lái)自于進(jìn)口，當(dāng)前許多單位運(yùn)用的都是德國(guó)賽多利斯公司出產(chǎn)的產(chǎn)物，其前期投入大概在2萬(wàn)元至3萬(wàn)元人民幣左右(包含100套無(wú)菌包裝的NPS，12元/每套)。因?yàn)槊總€(gè)樣品需選用3種不一樣的稀釋比進(jìn)行過(guò)濾培育，要運(yùn)用3套NPS，所以單個(gè)樣品的檢測(cè)本錢(qián)在50元人民幣左右。

　　

　　四．主張

　　

　　從兩者在幾個(gè)方面的比擬能夠看出，濾膜法具有省時(shí)、省料、設(shè)備需求低以及能夠收集較多的檢測(cè)水樣等長(zhǎng)處，并且跟著應(yīng)急檢測(cè)機(jī)制的樹(shù)立，當(dāng)需求咱們對(duì)各種突發(fā)環(huán)境污染事情(病院廢水能否加氯處置、河湖能否受日子廢水污染)敏捷做出反響，更快地取得必定成果的時(shí)分，其長(zhǎng)處越發(fā)杰出。

　　

　　因而在實(shí)踐檢測(cè)工作中，咱們能夠?qū)V膜法作為首要檢測(cè)辦法，并采納辦法戰(zhàn)勝其易受水樣混濁度、其它菌種和有毒物質(zhì)攪擾的局限性，疾速反映水質(zhì)狀況，為監(jiān)督管理部門(mén)供給科學(xué)數(shù)據(jù)；將多管發(fā)酵法作為輔佐辦法，經(jīng)過(guò)其來(lái)對(duì)濾膜法培育的可疑菌種進(jìn)行判定，然后使檢測(cè)成果愈加精確，只要這樣，水中的細(xì)菌學(xué)檢測(cè)才干順暢、高效的展開(kāi)。

　光照培養(yǎng)箱在多管發(fā)酵法注重事項(xiàng)

　　

　　1．樣品的保管采樣用的容器運(yùn)用前應(yīng)蓋好瓶蓋，用牛皮紙將瓶蓋和瓶頸處包裹好，置枯燥箱160℃-170℃干熱滅菌2h，或用高壓蒸汽滅菌器121℃滅菌15min。采樣后水樣的正確保管也很重要，如保管不妥可使樣品中的大腸菌群細(xì)菌或在必定條件下再成長(zhǎng)，這些都將影響檢測(cè)成果的精確性。檢測(cè)室接到水樣后，應(yīng)當(dāng)即檢測(cè)，如因故不能檢測(cè)時(shí)，應(yīng)當(dāng)即將樣品置于冰箱內(nèi)(2℃-10℃)并于2小時(shí)內(nèi)檢測(cè)。

　　

　　2．培育溫度的需求總大腸菌群中的細(xì)菌除日子在腸道中外，在自然環(huán)境中的水與土壤中也常常存在，但此等在自然環(huán)境中日子的大腸菌群培育的最合適溫度為25℃左右，如在37℃培育則仍可成長(zhǎng)，但如將培育溫度再升高至44．5℃，則不再成長(zhǎng)，而直接來(lái)自糞便的大腸菌群細(xì)菌，習(xí)慣于37℃左右成長(zhǎng)，如將培育溫度升高至44．5℃仍可持續(xù)成長(zhǎng)。因而，可用進(jìn)步培育溫度的辦法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)別，兩種辦法也都依據(jù)此理。將接種好的樣品或裝有濾膜的培育基放入光照培養(yǎng)箱時(shí)，箱內(nèi)溫度必定要到達(dá)所需求的溫度(44.5±0.5℃)時(shí)，方可放入。如用恒溫水浴箱時(shí)，其水面要高于接種物面，放濾膜的培育皿要沉到水浴箱底部。

　　

　　3．加氯水樣的處置經(jīng)氯處置消毒過(guò)的水樣，水中富含必定量的余氯，使大腸菌群處于受損或受按捺狀況，在收集水樣時(shí)應(yīng)提早在采樣瓶中加硫代硫酸鈉，硫代硫酸鈉能夠脫氯，使受損的細(xì)菌得以復(fù)蘇與修正，然后避免呈現(xiàn)計(jì)數(shù)成果偏低乃至假陰性的表象。此外余氯對(duì)濾膜法培育的細(xì)菌其按捺效果尤為顯著，所以抽濾時(shí)應(yīng)對(duì)水樣進(jìn)行許多無(wú)菌水稀釋，以削減余氯的殘留。

　　

　　4．培育物質(zhì)的制備與保管

　　

　　⑴.多管發(fā)酵法所運(yùn)用的培育液在分裝于各發(fā)酵管中后，應(yīng)將發(fā)酵管趕快放于高壓蒸汽滅菌器中，在115℃滅菌20min(注重：這個(gè)溫度也應(yīng)操控好，既到達(dá)滅菌的效果，還要避免培育物質(zhì)分化丟失)，然后儲(chǔ)存于冰箱或暗處備用。

　　

　?、?濾膜法所選用的M-FC培育基多運(yùn)用外購(gòu)的制品，培育基中苯胺藍(lán)的純度和質(zhì)量往往影響菌落的色彩，因而，無(wú)菌包裝的成套培育基在運(yùn)用前，*先接種典型糞大腸菌，以調(diào)查比照菌落的色彩，來(lái)判定其穩(wěn)定性。

　　

　　5．成果核算

　　

　?、?多管發(fā)酵法的成果是依據(jù)不一樣接種量的發(fā)酵管所呈現(xiàn)陽(yáng)性成果的數(shù)目，從MPN表中查得相應(yīng)的MPN指數(shù)，來(lái)核算每升水中糞大腸菌群細(xì)菌的MPN值。MPN是“MostProbableNumber"的縮寫(xiě)，指最大能夠數(shù)，它是依據(jù)核算學(xué)理論，估量水體中的菌群密度和清潔質(zhì)量的一種辦法，所以精確判別不一樣接種量發(fā)酵管的陽(yáng)性數(shù)是非常重要的，不然將招致較大差錯(cuò)。

　　

　?、?濾膜法的成果是計(jì)數(shù)濾膜上呈藍(lán)或藍(lán)綠色的菌落，來(lái)核算出每升水樣中的糞大腸菌群數(shù)。所認(rèn)為便于計(jì)數(shù)，削減差錯(cuò)，抱負(fù)的水樣體積是一片濾膜上成長(zhǎng)20-60個(gè)糞大腸菌群菌落。