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技術(shù)文章

問答之血清滅活問題

閱讀:1275          發(fā)布時間:2021-3-17

1、問:加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎?

答:不是必須的,看做什么實驗了。

2、問:四季青胎牛血清滅活是56℃30分鐘嗎?

答:如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細(xì)胞,血清一般是不需要滅活的,這樣可以有效保存血清中的生長因子。但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補(bǔ)體受體的細(xì)胞,如內(nèi)皮細(xì)胞,血清是需要滅活,一般是56℃,30min。

3、問:我要做滋養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng),胎牛血清要滅活嗎?

答:進(jìn)口的一般都已滅活,國產(chǎn)的不一定,還是滅活一下再用較安全。

4、問:我用病毒上清轉(zhuǎn)染細(xì)胞,培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎?因為血清中可能有些補(bǔ)體和抗體,是不是會影響轉(zhuǎn)染?我想未滅活的血清中含些抗體補(bǔ)體可能會和病毒相結(jié)合,影響轉(zhuǎn)染,正確嗎?細(xì)胞是單核細(xì)胞白血病細(xì)胞,病毒是病毒包裝細(xì)胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時,目的是什么?

答:血清一定要滅活,可以先用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主結(jié)合過程的干擾,一般是2-6小時,根據(jù)細(xì)胞的狀態(tài)決定。血清不一定需要滅活,滅活的目的是將血清中的補(bǔ)體滅活!這要根據(jù)實際情況而定,如果沒有把握那就滅活吧,也不麻煩56度半個小時。

5、問:(1)我買的是杭州四季青的新生牛血清,要滅活嗎?有些說法是需要,有些說直接解凍后就可以加入到培養(yǎng)基中;我配制胰蛋白酶液,用的是D-PBS,有關(guān)系嗎?

答:關(guān)于血清的熱滅活,是很多人感興趣也存在一定爭議的話題。大多數(shù)實驗室將血清的熱滅活還是作為常規(guī)來執(zhí)行,因為有兩個作用,第yi是滅活補(bǔ)體,第二是滅活血清中可能存在的支原體。但是實驗者并沒有考慮熱處理對血清中的生長因子、氨基酸等成分帶來的負(fù)面影響。

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