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小鼠血管內(nèi)皮生長因子試劑盒操作手冊--上海滬鼎生物
一、實(shí)驗(yàn)原理
    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)水平。用純化的小鼠血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)，再與HRP 標(biāo)記的血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF)濃度。
二、標(biāo)本要求 
    1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
    2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
    標(biāo)本收集：
    1.收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。
    2.血漿抗凝劑推薦使用EDTA。避免使用溶血，高血脂標(biāo)本。
    3.標(biāo)本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。
    4.標(biāo)本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃，-70℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融，3-6月內(nèi)檢測。
    在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測的樣本，及時儲存在4℃?zhèn)溆?。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?，有條件的，-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。
三、“小鼠血管內(nèi)皮生長因子試劑盒"操作示意圖

操作指南：固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標(biāo)物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結(jié)果
四、注意事項(xiàng)
    1.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
    2.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
    3.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
    4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 

產(chǎn)品說明：本試劑盒僅供研究使用。