人抗內(nèi)因子抗體(IFA)ELISA試劑盒實驗原理
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
人抗內(nèi)因子抗體(IFA)ELISA試劑盒特點概述
1.專一性強(qiáng)?？乖c抗體的免疫反應(yīng)是專一反應(yīng)，而免疫酶技術(shù)以免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，所檢測的對象是抗原(或抗體)，使用的抗體除標(biāo)記了酶以外，與普通抗體的免疫反應(yīng)特性并無多大差別。
2.靈敏度高。由于抗體聯(lián)結(jié)上了酶，因此，借助于酶與底物的顯色反應(yīng)，顯示抗原與抗體的結(jié)合，大大提高了檢測的靈敏性，使檢測水平接近放射免疫測定法。
3.樣品易保存。經(jīng)過酶反應(yīng)顯示的有色產(chǎn)物大多比較穩(wěn)定，因此有利于樣品的保存。
4.結(jié)果易觀察。對檢測結(jié)果即可用肉眼觀察，又可用顯微鏡觀察，也可以用分光光度計進(jìn)行比色測定，還可用顯微鏡觀察。這是因為某些酶反應(yīng)產(chǎn)物能使電子密度發(fā)生改變，從而引起被檢測物的顯示。
5.可以定量測定。溶液中的抗原物質(zhì)，應(yīng)用酶免吸附技術(shù)進(jìn)行比色測定，依據(jù)光密度值的變化，可以定量。預(yù)計用細(xì)胞分光光度計可對組織內(nèi)的抗原進(jìn)行免疫酶技術(shù)的定量測定。
6.可以大規(guī)模測定樣品。如有成千上萬份樣品需要進(jìn)行檢測，免疫酶技術(shù)都能在較短時間內(nèi)完成。
7.儀器和試劑簡單。對免疫沒技術(shù)來說，不需要熒光顯微鏡，也不需要測定放射性的特殊儀器，所用儀器及試劑均屬一般性儀器與試劑，普通實驗室及生產(chǎn)應(yīng)用單位均易購置
8.*，質(zhì)量保證，zui大限度的節(jié)省實驗經(jīng)費。
人抗內(nèi)因子抗體(IFA)ELISA試劑盒操作步驟
1）取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。
2）分組：取出96孔板，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個濃度）、空白孔、待測樣品組。
3）標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：準(zhǔn)備小試管6 只，依次編好號碼，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號標(biāo)準(zhǔn)品。
注：為減少實驗誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。
4）加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
6）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。
7）加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液（空白對照孔除外）。
8）溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時。
9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙*拍干。
10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。
11）終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘，加入50ul終止液。
12）讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值。
注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。
數(shù)據(jù)計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，即為樣品的實際濃度。
人抗內(nèi)因子抗體(IFA)ELISA試劑盒注意事項
1）實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2）加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔間的時間間隔過大，否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時間，從而影響實驗的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。
3）孵育：嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進(jìn)行。
4）反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
5）建議實驗前預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，計算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
6）建議使用本試劑盒時先做預(yù)實驗（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個標(biāo)本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商，如果因運輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存：2-8℃
2.有效期：6個月
人抗內(nèi)因子抗體(IFA)ELISA試劑盒訂貨說明
1）賣方確保所訂產(chǎn)品與目錄技術(shù)指標(biāo)保持*；
2）為了確保買方產(chǎn)品在運輸中的質(zhì)量，對有特殊要求的低溫產(chǎn)品予以濕冰運輸。
3）收到貨物后如出現(xiàn)質(zhì)量問題，買方需在收到貨物一個月內(nèi)向賣方提出書面異議。買方逾期不提出異議，視為貨物符合其要求，賣方不付任何責(zé)任。
4）出現(xiàn)質(zhì)量以外的問題，如破損等，買方應(yīng)在收貨后一個周內(nèi)提出。買方未按時提出異議，視為該產(chǎn)品合格。
本公司對所有售出的產(chǎn)品保證質(zhì)量，并提供良好的售后服務(wù)，有關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量的投訴，請在收到貨物的32天內(nèi)以書面形式提出，并向我公司技術(shù)人員提供相應(yīng)的材料，我們會及時派人解決。所有形式的賠償或退換僅限于產(chǎn)品本身，不涉及其他間接內(nèi)容。凡購買本公司任意款elisa試劑盒，均可享受免費代測服務(wù)，并提供技術(shù)指