中文名稱：豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒

組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。

規(guī)格：96T/48T

性狀：液體

保存：2-8℃

有效期：6個月

“豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒”實驗原理

用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。

操作說明

1．試劑盒保存：-20℃(較長時間不用時)；2-8℃(頻繁使用時)。

2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

3．中、英文說明書可能會有不*之處，請以英文說明書為準。

4．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結果造成任何影響。

試劑盒組成

標本要求 

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

溫育：操作同3。

洗滌：操作同5。

顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

試劑盒說明
1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導致出現(xiàn)錯誤的結果。
2. 小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。而且，洗滌不充分將影響試驗結果。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，具體以標簽上的標示為準。
4. 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結果造成任何影響。
6. 中、英文說明書可能會有不*之處，請以英文說明書為準。
7. 所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
8. 有效期：6個月

ELISA試劑盒實驗操作的常見問題：

1. 問--客戶用48T試劑盒，大概只有十個樣所以他一次用不完那么多板條，但是他想做兩次，可封板膜只有一張，那如果用完了怎么辦？可以用什么別的東西取代嗎？
答--可以把封板膜剪掉，用多少剪多少也可以用封口膜替代。
2. 問--實驗過程中溫育是放在哪溫育呢？
答--可以在水浴箱、細胞培養(yǎng)箱和烘干箱里面都行，只要恒定溫度為37度。

“豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒”標本處理

1、 只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。

2、 實驗前應預測標本含量，如果標本濃度過高，應對標本進行稀釋，使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。

3、 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，建議進行預實驗驗證其有效性，并注意留存樣本。

4、 使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質(zhì)的引入導致  ELISA實驗結果偏差。

5、 若樣本為細胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素 較多，如：細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。

6、 某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。

7、 建議使用新鮮樣本，保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導致實驗結果偏 差。