一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

【產(chǎn)品名稱】：雞白介素3(IL-3)ELISA試劑盒

【檢測(cè)方法】：酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)

【產(chǎn)品性狀】：96T/48T，盒裝液體(兩種統(tǒng)一規(guī)格)

【貯藏條件】：2-8°C

【有 效 期】：二年，我公司Elisa試劑盒均為批次，可放心購(gòu)買。

【主要成分】：酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等。

【種    屬】馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動(dòng)植物。

【產(chǎn)品單價(jià)】（ELISA試劑盒具體折扣），可免費(fèi)代測(cè)，含稅含運(yùn)費(fèi)。

【標(biāo)    本】血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等

注：標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。

二、實(shí)驗(yàn)原理：
    ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
三．實(shí)驗(yàn)材料與試劑配制：
1.儀器與材料：酶標(biāo)儀（使用前預(yù)熱30分鐘），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。
2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液備用。
四．“雞白介素3(IL-3)ELISA試劑盒”樣品收集、處理及保存
1）.細(xì)胞培養(yǎng)上清：
適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無(wú)菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
2）細(xì)胞：
用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右，通過(guò)反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測(cè)。
3）血清：
在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測(cè)。
4）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
5）體液：
包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
6.）組織標(biāo)本：
切取組織標(biāo)本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測(cè)。
樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
7）保存：
如果樣品不能立即檢測(cè)，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
五．操作步驟：
1）取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。
2）分組：取出96孔板，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個(gè)濃度）、空白孔、待測(cè)樣品組。
3）標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：準(zhǔn)備小試管6 只，依次編好號(hào)碼，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。
注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。
4）加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
6）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。
7）加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。
8）溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。
9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙*拍干。
10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。
11）終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘，加入50ul終止液。
12）讀板：在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值。
注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。

六.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法：
可以采用各種繪圖軟件來(lái)繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線，我公司以“Curve Exert1.3”軟件為例，繪制的ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線如下：

七．?dāng)?shù)據(jù)計(jì)算：
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，即為樣品的實(shí)際濃度。
八．“雞白介素3(IL-3)ELISA試劑盒”注意事項(xiàng)：
1）實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。
2）加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔間的時(shí)間間隔過(guò)大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。
3）孵育：嚴(yán)格按照說(shuō)明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
4）建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
5）建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本），如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn)，可和所購(gòu)經(jīng)銷商，如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
九．*推薦:

雞分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA試劑盒
雞α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒 
雞白介素18(IL-18)ELISA試劑盒 
雞白介素1(IL-1)ELISA試劑盒 
雞病毒性腸炎病毒(DEV)ELISA試劑盒 
雞肌紅蛋白(MYO/MB) ELISA試劑盒
雞白介素9(IL-9)ELISA試劑盒
雞白介素3(IL-3)ELISA試劑盒
雞白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒 
雞轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒 
雞C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒 
雞血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA試劑盒 
雞免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒