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主要用途

 

石蠟切片神經(jīng)組織髓鞘（myelin sheath）加利亞斯（GALLYAS）銀染試劑是一種旨在標(biāo)準(zhǔn)化的化學(xué)分離石蠟方法和膠體銀結(jié)合技術(shù)，分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中神經(jīng)髓鞘質(zhì)（myelin）或髓鞘質(zhì)包裹的神經(jīng)纖維等而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良加利亞斯（GALLYAS）銀染方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于石蠟包埋的腦組織或外周神經(jīng)組織切片的神經(jīng)髓鞘質(zhì)及其相關(guān)纖維組織檢測。廣泛用于腦理生理解剖學(xué)的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

 

技術(shù)背景

 

髓鞘是白色脂肪、無生命的物質(zhì)存在于神經(jīng)纖維周圍形成一個(gè)絕緣和保護(hù)作用的鞘。意大利科學(xué)家加利亞斯（GALLYAS）于1979年發(fā)明了神經(jīng)組織髓鞘浸銀染色技術(shù)，基于膠體銀與髓鞘的結(jié)合，呈現(xiàn)金黑色染色效果。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

固著液（Reagent A）               毫升

 脫蠟液（Reagent B）              毫升（自備）

補(bǔ)水液A（Reagent C）          毫升

補(bǔ)水液B（Reagent D）          毫升

補(bǔ)水液C（Reagent E）          毫升

清理液（Reagent F）           毫升

凈化液（Reagent G）           毫升

澄清液A（Reagent H1）          毫升

澄清液B（Reagent H2）          毫升

澄清液C（Reagent H3）              毫升

澄清液D（Reagent H4）          毫升

銀染液（Reagent I）           毫升

酸性液（Reagent J）               毫升

顯色液A（Reagent K1）          毫升

顯色液B（Reagent K2）           毫升

顯色液C（Reagent K3）           微升

終止液（Reagent L）            毫升

去色液（Reagent M）            毫升

穩(wěn)定液（Reagent N）            毫升

產(chǎn)品說明書                1份

 

 

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保證3月

 

用戶自備

 

無菌手術(shù)刀和鑷子：用于解剖動(dòng)物腦組織

小型玻璃染色缸或60毫米玻璃培養(yǎng)皿：用于組織或切片處理的容器

切片機(jī)：用于組織切片

明膠化載玻片和蓋玻片：用于切片后鋪片

中性樹脂：用于切片封片

光學(xué)顯微鏡：用于切片染色后觀察分析

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

一、 樣本預(yù)處理

 

1． 常規(guī)麻醉動(dòng)物和手術(shù)（建議：使用用戶自備的0.1摩爾食物磷酸緩沖液由心臟處灌注三次，每次60毫升，去除血液直至澄清）

2． 使用適量的用戶自備的4%多聚甲醛灌注處理

3． 即刻小心取出腦組織

4． 小心放進(jìn)xx毫升固著液（Reagent A）里

5． 室溫下浸泡孵育1周至1月（注意：密閉容器，避免干枯）

6． 用綿紙吸干組織塊

7． 即刻進(jìn)行常規(guī)20％蔗糖脫水（注意：組織沉底即可）和常規(guī)石蠟處理后包埋（注意：如果石蠟切片效果欠佳，建議直接使用振動(dòng)切片為佳）

8． 取出組織塊，進(jìn)行緩慢石蠟切片，為30至50微米（范圍5至100微米）厚，并鋪片在明膠化載玻片上

 

二、 脫蠟處理

 

1． 取出10片待測的30至40微米厚的石蠟包埋的組織切片 

2． 按下表依次放進(jìn)小染色缸里孵育

 

 

5． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

 

三、 樣本染色處理

 

實(shí)驗(yàn)開始前，移取xx毫升顯色液A（Reagent K1）、xx毫升顯色液B（Reagent K2）和xx微升顯色液C（Reagent K3）到2.2毫升離心管里，混勻后，標(biāo)記為顯色工作液（注意：可以進(jìn)行10次顯色操作。須根據(jù)具體用量新鮮配制，不宜久存），避光。然后進(jìn)行下列操作。

 

1． 小心加上xx微升凈化液（Reagent G）在切片上，覆蓋樣品表面

2． 室溫下孵育30分鐘

3． 小心抽去凈化液

4． 小心加上xx微升澄清液A（Reagent H1）在切片上，覆蓋樣品表面

5． 室溫下孵育2分鐘

6． 小心抽去澄清液A

7． 小心加上xx微升澄清液B（Reagent H2）在切片上，覆蓋樣品表面

8． 室溫下孵育2分鐘

9． 小心抽去澄清液B

10． 小心加上xx微升澄清液C（Reagent H3）在切片上，覆蓋樣品表面

11． 室溫下孵育2分鐘

12． 小心抽去澄清液C

13． 小心加上xx微升澄清液D（Reagent H4）在切片上，覆蓋樣品表面

14． 室溫下孵育2分鐘

15． 小心抽去澄清液D

16． 小心加上xx微升銀染液（Reagent I）在切片上，覆蓋樣品表面

17． 室溫下孵育45分鐘，避免光照

18． 小心抽去銀染液

19． 小心加上xx微升酸性液（Reagent J）在切片上，覆蓋樣品表面

20． 室溫下孵育2分鐘

21． 小心抽去酸性液

22． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟19至21二次

23． 放進(jìn)6孔板的一孔里

24． 加入xx毫升固著液（Reagent A）

25． 室溫下浸泡孵育1周至1月，避免光照

26． 小心加上xx微升酸性液（Reagent J）在切片上，覆蓋樣品表面

27． 室溫下孵育2分鐘

28． 小心抽去酸性液

29． 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟26至28一次

30． 小心加上200微升上述配制的顯色工作液在切片上，覆蓋樣品表面

31． 室溫下孵育15至60分鐘，或直至背景呈現(xiàn)金黃色，避免光照

32． 小心抽去顯色液

33． 小心加上xx微升終止液（Reagent L）在切片上，覆蓋樣品表面

34． 室溫下孵育2分鐘

35． 小心抽去終止液

36． 小心加上xx微升去色液（Reagent M）在切片上，覆蓋樣品表面

37． 室溫下孵育10秒，或觀察背景褪色程度（注意：不宜過度褪色）

38． 小心抽去去色液

39． 小心加上xx微升穩(wěn)定液（Reagent N）在切片上，覆蓋樣品表面

40． 室溫下孵育1分鐘

41． 小心抽去穩(wěn)定液

42． 使用用戶自備的無離子水清洗3次

43． 透明處理

44． 放上蓋玻片或封片（中性樹脂）

45． 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：神經(jīng)髓鞘質(zhì)或髓鞘質(zhì)包裹的神經(jīng)纖維呈現(xiàn)金黑色

 銀染試劑盒