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技術(shù)文章

石蠟切片淀粉樣蛋白硫磺素?zé)晒馊旧噭┖姓f明書

閱讀:2642          發(fā)布時間:2022-8-16

HL80162.1 v.A

 

石蠟切片淀粉樣蛋白(AMYLOID)硫磺素Sthioflavine S)熒光染色試劑盒

產(chǎn)品說明書

 

主要用途

 

石蠟切片淀粉樣蛋白(AMYLOID)硫磺素Sthioflavine S)熒光染色試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化的化學(xué)分離石蠟方法和硫磺素S染色技術(shù),與淀粉樣蛋白結(jié)合,來分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中蘋果綠熒光現(xiàn)象而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于石蠟包埋組織切片的淀粉樣蛋白檢測。廣泛用于淀粉樣蛋白樣疾病的病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,熒光清晰。

 

技術(shù)背景

 

淀粉樣蛋白(AMYLOID)是一種同質(zhì)性、嗜伊紅性(eosinophilic)、不溶性的纖維蛋白(fibrous protein)聚合體,具有共同的β交叉折疊層(β sheet)組織結(jié)構(gòu)特征,沉積在細(xì)胞外。蛋白質(zhì)錯誤折疊misfolding),且異常自我聚集將導(dǎo)致淀粉樣變性(amyloidosis),細(xì)胞毒纖維沉積,產(chǎn)生組織損傷,進(jìn)而引起23種不同淀粉樣蛋白綜合癥,超過400種疾病,包括阿茨漢姆癥、巴金森氏癥、II型糖尿病、白內(nèi)障、朊病毒疾病等。淀粉樣蛋白斑(amyloid plaque)和神經(jīng)纖維纏結(jié)(neurofibrillary tanglesNFT)是淀粉樣蛋白綜合征的病理性特征。硫磺素Sthioflavine S),苯并噻唑(benzothiazole)衍生物,含有至少6種成分,通過脫氫硫甲苯胺dehydrothiotoluidine與磺酸sulfonic acid的甲基化而成,的淀粉樣蛋白熒光探針。一旦與淀粉樣蛋白纖維結(jié)合,在熒光顯微鏡下(激發(fā)波長470nm,散發(fā)波長510nm),呈現(xiàn)蘋果綠熒光。

  

產(chǎn)品內(nèi)容

 

蠟液(Reagent A                XX毫升

補(bǔ)水液AReagent B          XX毫升

補(bǔ)水液BReagent C          XX毫升

補(bǔ)水液CReagent D          XX毫升

清理液(Reagent E           XX毫升

氧化液(Reagent F           XX毫升

去干擾液(Reagent G          XX毫升

染色液(Reagent H           XX毫升

強(qiáng)化液(Reagent I           XX毫升

穩(wěn)定液(Reagent J           XX毫升

產(chǎn)品說明書                1

 

保存方式

 

保存染色液(Reagent H-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;染色液(Reagent H),避免光照;有效保證3

 

用戶自備

 

小型染色缸:用于石蠟切片的蠟操作

(共聚焦)熒光顯微鏡:用于組織細(xì)胞染色后觀察分析

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

一、 蠟處理

 

1. 取出10片待測的石蠟包埋的組織切片(注意:石蠟包埋前,組織切片須用10%甲醛4℃條件下,固定16小時,此步很重要

2. (選擇操作)放進(jìn)80℃烘箱,孵育30分鐘

3. (選擇操作)室溫下靜置15分鐘

4. 按下表依次放進(jìn)小染色缸里孵育

 

染色缸 

孵育時間 

XX毫升蠟液Reagent A 

15分鐘

XX毫升蠟液Reagent A

15分鐘

XX毫升蠟液Reagent A

15分鐘

XX毫升補(bǔ)水液AReagent B

3分鐘

XX毫升補(bǔ)水液BReagent C

3分鐘

XX毫升補(bǔ)水液CReagent D

3分鐘

 

5. 小心移去切片上的補(bǔ)水液CReagent D

6. 小心加上XX微升清理液(Reagent E在切片上,鋪滿整個切片樣品表面

7. 室溫下孵育5分鐘

8. 小心移去切片上的清理液(Reagent E

二、樣本染色處理

1. 小心加上XX微升氧化液(Reagent F,鋪滿整個片樣品表面

2. 室溫下孵育5分鐘 

3. 小心移去片上的氧化液(Reagent F

4. 小心加上XX微升清理液(Reagent E在切片上,鋪滿整個切片樣品表面

5. 室溫下孵育1分鐘

6. 小心移去切片上的清理液(Reagent E

7. 小心加上XX微升去干擾液(Reagent G,鋪滿整個片樣品表面

8. 室溫下孵育5分鐘 

9. 小心移去片上的去干擾液(Reagent G

10. 小心加上XX微升清理液(Reagent E在切片上,鋪滿整個切片樣品表面

11. 室溫下孵育1分鐘

12. 小心移去切片上的清理液(Reagent E

13. 小心加上XX微升染色液(Reagent H,鋪滿整個片樣品表面

14. 室溫下孵育8分鐘,避免光照

15. 小心移去片上的染色液(Reagent H

16. 小心加上XX微升強(qiáng)化液(Reagent I,鋪滿整個片樣品表面

17. 室溫下孵育1分鐘 

18. 小心移去片上的強(qiáng)化液(Reagent I

19. 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟1618一次

20. 小心加上XX微升清理液(Reagent E在切片上,鋪滿整個切片樣品表面

21. 室溫下孵育1分鐘

22. 小心移去切片上的清理液(Reagent E

23. 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟2022二次

24. 小心加上XX微升穩(wěn)定液(Reagent J,鋪滿整個片樣品表面

25. 4冰箱里孵30分鐘 

26. 小心移去片上的穩(wěn)定液(Reagent J

27. 小心加上XX微升清理液(Reagent E在切片上,鋪滿整個切片樣品表面

28. 室溫下孵育1分鐘

29. 小心移去切片上的清理液(Reagent E

30. 封片

31. 即刻在(共聚焦)熒光顯微鏡下激發(fā)波長470nm,散發(fā)波長510nm觀察:

淀粉樣蛋白:呈現(xiàn)蘋果綠熒光

 

注意事項(xiàng)

 

1. 本產(chǎn)品為50次操作

2. 操作時,須帶手套

3. 本產(chǎn)品友好使用于雙重染色或重疊染色,即首*行常規(guī)免疫熒光染色,然后進(jìn)行硫磺素S染色

4. 石蠟包埋前,組織切片須用10%甲醛4條件下,固定16小時,否則造成樣品支離破碎

5. 試劑溶液在樣品表面時,避免有氣泡存在,同時確保鋪滿樣品表面

6. 組織細(xì)胞染色完成后,即刻進(jìn)行熒光顯微鏡觀察 

7. 用戶可以使用DAPI濾波器波長進(jìn)行觀察

8. 本公司提供系列淀粉樣蛋白染色試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰

 

使用承諾

 

哈靈生物秉著信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾"的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后,應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定,保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題,請立即以書面形式(實(shí)驗(yàn)報告)與本公司聯(lián)系,并將該產(chǎn)品退回,經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致,本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯誤操作所致,本公司不承擔(dān)由此造成的損失。


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