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特殊石蠟切片總膽固醇菲律賓熒光直接染色試劑盒說明書
閱讀：821 發(fā)布時間：2023-3-8特殊石蠟切片總膽固醇（酯酶法）菲律賓（FILIPIN）熒光直接染色試劑盒
產品說明書
主要用途
特殊石蠟切片總膽固醇（酯酶法）菲律賓（FILIPIN）熒光直接染色試劑是一種旨在通過特殊脫蠟處理，進
而使用膽固醇酯酶水解和熒光染料菲律賓（FILIPIN）特異性與游離膽固醇反應，形成復合體，并產生藍色
熒光，分析石蠟包埋組織切片中總膽固醇的而經典的技術方法。該技術經過精心改良、成功實驗證明
的。主要適用于各種人體和動物組織石蠟切片中總膽固醇的檢測。廣泛用于組織病理生理的研究。產品嚴
格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，熒光清晰。 技術背景
膽固醇（cholesterol）是一類稱之為固醇類（sterols）或聚類異戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）
的多環(huán)化合物（polycyclic compound）。其分子式為 cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離（free form）和脂化結
合（ester）兩種形式廣泛存在于所有動物組織中，主要以非脂化形式存在于細胞膜中。在膜功能和脂代謝
以及激素合成中起著重要作用。菲律賓（FILIPIN）是一類由四種同分異構體的多烯抗生素（polyene
antibiotics）或多馬霉素（polyene macrolide）的總稱。源自于 S. FILIPINENSIS 細菌的培養(yǎng)液中。其分子式
為 C35H58O11，分子量為 654.8。首先在膽固醇酯酶（cholesterol esterase）的水解下，酯化膽固醇（cholesterel ester）轉化為游離膽固醇，然后使用菲律賓與所有游離膽固醇結合形成聚集體或復合物，產生熒光。由于
石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過程中，有機溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的脂質成分，因此
使用非二甲苯類脫蠟，以保護組織中的膽固醇成分是菲律賓染色的關鍵。 產品內容
脫蠟液（Reagent A） 20 毫升
凈化液（Reagent B） 5 毫升
清理液（Reagent C） 20 毫升
水解液（Reagent D） 4 毫升
抗干擾液（Reagent E） 4 毫升
染色液（Reagent F） 2 毫升
產品說明書 1 份
保存方式
保存水解液（Reagent D）和染色液（Reagent F）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里；
有效保證 6 月
用戶自備
熒光顯微鏡：用于樣品染色后觀察分析
實驗步驟
一、 脫蠟處理
1． 取出待測的 6 微米厚的石蠟包埋的組織切片
2． 放進 80℃烘箱，孵育 30 分鐘
3． 取出組織切片
4． 小心加上 500 微升脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面（注意：使用前，搖勻脫蠟
液）
5． 放進 70℃恒溫培養(yǎng)箱里孵育 5 分鐘
6． 即刻小心移去切片上的脫蠟液（Reagent A）
7． （選擇步驟）重復實驗步驟 2 至 4 一次
8． 小心加上 200 微升凈化液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
9． 室溫下孵育 2 分鐘
10．小心移去切片上的凈化液（Reagent B）
11．進一步依次常規(guī)凈化處理：用戶自備的 100%乙醇、70%乙醇、50%乙醇
12．小心加上 200 微升清理液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
13．室溫下孵育 3 分鐘
14．小心移去切片上的清理液（Reagent C）
三、樣本染色處理
1． 小心加入 200 微升水解液（Reagent C），鋪滿整個樣品表面
2． 室溫下孵育 1 小時（注意：可以延長至 4 小時，避免干枯）
3． 小心移去水解液（Reagent D）
4． 小心加入 200 微升清理液（Reagent C），清洗樣品表面
5． 小心移去清理液（Reagent C）
6． 重復實驗步驟 4 至 5 一次
7． 小心加上 200 微升抗干擾液（Reagent E），鋪滿整個切片樣品表面
8． 室溫下孵育 10 分鐘
9． 小心移去切片上的抗干擾液（Reagent E）
10．小心加上 100 微升染色液（Reagent F），鋪滿整個切片樣品表面
11．室溫下孵育 30 分鐘，避免光照
12．小心移去切片上的染色液（Reagent F）
13．小心加上 200 微升清理液（Reagent C），清洗樣品表面
14．小心移去切片上的清理液（Reagent C）
15．重復實驗步驟 13 至 14 二次
16．即刻放上蓋玻片或封片
17．在熒光顯微鏡下觀察：激發(fā)波長：340nm；散發(fā)波長：430nm――膽固醇陽性呈現藍色熒光
注意事項
1． 本產品為 20 次操作
2． 操作時，須戴手套
3． 建議用戶避免使用常規(guī)石蠟包埋組織切片，即石蠟包埋前避免二甲苯等透明處理
2
3
4． 操作時，避免污染母液
5． 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
6． 熒光容易受到光漂白（photobleach），建議使用抗淬滅劑Ⅰ－12058.2
7． 樣品染色完成后，即刻進行熒光顯微鏡觀察
8． 本公司提供系列組織細胞膽固醇染色試劑產品
質量標準
1． 本產品經鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產品經鑒定熒光清晰