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石蠟切片平滑肌細(xì)胞α平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）免疫組化染色試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明書

 

主要用途

 

石蠟切片平滑肌細(xì)胞α平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）免疫組化染色試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化的化學(xué)方法，包括石蠟分離、抗原修復(fù)等，以及免疫抗體顯色技術(shù)，即通過(guò)抗α平滑肌肌動(dòng)蛋白單克隆抗體以及辣根過(guò)氧化物酶綴合物二抗，使用染料二氨基聯(lián)苯胺染色顯示棕褐色，從存檔中的石蠟包埋的組織切片中分析α平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)和分布狀況的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于各種人體、大鼠、小鼠等石蠟包埋組織（肌肉、乳腺組織、子宮組織等）切片的平滑肌細(xì)胞α平滑肌肌動(dòng)蛋白測(cè)定。廣泛用于平滑肌細(xì)胞識(shí)別、分化、異常病變的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，反應(yīng)敏感，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。

 

技術(shù)背景

 

肌動(dòng)蛋白（actin）在所有真核細(xì)胞普遍表達(dá)，高度保留的蛋白，構(gòu)成細(xì)胞骨架的主要元素之一。肌動(dòng)蛋白有6個(gè)亞型，在心肌、骨骼肌、平滑肌以及非肌肉細(xì)胞的胞漿中表達(dá)，調(diào)節(jié)收縮潛力、控制細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和運(yùn)動(dòng)。其中4個(gè)亞型成為肌肉組織細(xì)胞的分化標(biāo)志。α平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）是平滑肌細(xì)胞分化的標(biāo)志。主要在血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)，受到激素和細(xì)胞繁殖的調(diào)節(jié)。腫瘤轉(zhuǎn)化和動(dòng)脈粥樣硬化會(huì)引起α平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)異常。使用抗α平滑肌肌動(dòng)蛋白單克隆抗體可以識(shí)別在各種組織，包括乳腺、唾液腺、汗腺、支氣管腺體、平滑肌、血管平滑肌、子宮基質(zhì)、前列腺基質(zhì)（stroma）細(xì)胞、周細(xì)胞（pericyte）、軟骨細(xì)胞等正?；蚰[瘤組織的平滑肌細(xì)胞或α平滑肌肌動(dòng)蛋白及其各種分化，包括成肌纖維細(xì)胞（myofibroblast）、肌上皮細(xì)胞（myoepithelial）等。通過(guò)抗α平滑肌肌動(dòng)蛋白單克隆抗體以及辣根過(guò)氧化物酶綴合物二抗（Peroxidase conjugated antibody）反應(yīng)，進(jìn)而使用染料二氨基聯(lián)苯胺染色顯示α平滑肌肌動(dòng)蛋白細(xì)胞為棕褐色。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

脫蠟液（Reagent A）                 毫升

補(bǔ)水液A（Reagent B）         毫升

補(bǔ)水液B（Reagent C）         毫升

補(bǔ)水液C（Reagent D）         毫升

補(bǔ)水液D（Reagent E）         毫升

清理液（Reagent F）          毫升

酶解液（Reagent G）          毫升

封阻液（Reagent H）          毫升

一抗液（Reagent I）          毫升

二抗液（Reagent J）          毫升

顯色液A（Reagent K）         微升

顯色液B（Reagent L）         毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書             1份

 

保存方式

 

保存酶解液（Reagent G）、一抗液（Reagent I）、二抗液（Reagent J）和顯色液A（Reagent K）在－20℃冰箱里，嚴(yán)格避免反復(fù)凍融，其余的保存在4℃冰箱里；二抗液（Reagent J）和顯色液A（Reagent K），避免光照；有效保證3月

 

用戶自備

 

小型染色缸：用于石蠟切片的脫蠟和染色操作

光學(xué)顯微鏡：用于細(xì)胞染色后觀察分析

 

特別注意

 

1． 顯色液A（Reagent K）和顯色液B（Reagent L）必須在實(shí)驗(yàn)操作前即刻混勻；混勻后切忌久放不用或儲(chǔ)存后備用；用完扔掉

2． 顯色液A（Reagent K）如果出現(xiàn)沉淀，須過(guò)濾后再用

3． 石蠟包埋前，組織切片須用1％多聚甲醛或常規(guī)固定液4℃條件下，固定16小時(shí)，否則組織易脫落

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

一、 脫蠟處理

 

1． 取出10片待測(cè)的石蠟包埋的6微米厚組織切片（注意：石蠟包埋前，組織切片須用1％多聚甲醛4℃條件下，固定16小時(shí)，此步很重要）

2． 按下表依次放進(jìn)小染色缸里孵育

 

3． 小心移去切片上的補(bǔ)水液D（Reagent E）

4． 小心加上xx微升清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

5． 室溫下孵育5分鐘

6． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

二、 蛋白消解處理

1． 小心加上xx微升酶解液（Reagent G），鋪滿整個(gè)切片樣品表面

2． 室溫下孵育5分鐘

3． 小心移去切片上的酶解液（Reagent G）

4． 室溫下，將切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中孵育5分鐘

5． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

6． 小心加上xx微升封阻液（Reagent H），鋪滿整個(gè)切片樣品表面

7． 室溫下孵育5分鐘

8． 小心移去切片上的封阻液（Reagent H）

9． 室溫下，將切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中孵育5分鐘

10． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

 

三、 免疫標(biāo)記處理

 

1． 小心加上xx微升含有一抗液（Reagent I），鋪滿整個(gè)切片樣品表面

2． 在37℃濕潤(rùn)的培養(yǎng)箱里，孵育1小時(shí)，保持濕潤(rùn)，避免干燥（注意：可以使用蓋玻片蓋上孵育）

3． 小心移去切片上的一抗液（Reagent I）

4． 室溫下，小心將切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘

5． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

 

四、 樣本染色處理

 

在染色前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的顯色液A（Reagent K）置入冰槽里融化，然后移取xx微升顯色液A（Reagent K）和1.8毫升顯色液B（Reagent L）到2毫升離心管，充分混勻，標(biāo)記為顯色工作液，置于暗室。然后進(jìn)行下列操作：

 

1． 小心加上xx微升二抗液（Reagent J）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面（注意：可以使用蓋玻片蓋上孵育）

2． 室溫下孵育30分鐘，避免光照

3． 小心移去切片上的二抗液（Reagent J）

4． 室溫下，小心將切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中孵育2分鐘

5． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

6． 小心加上xx微升含有顯色液A（Reagent K）和顯色液B（Reagent L）的顯色工作液，鋪滿整個(gè)切片樣品表面

7． 室溫下孵育5至30分鐘，或直至樣本出現(xiàn)棕褐色

8． 小心移去切片上含有顯色液A（Reagent K）和顯色液B（Reagent L）的顯色工作液

9． 室溫下，小心將切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中浸泡5秒

10． 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

11． （選擇步驟）進(jìn)行甲基綠復(fù)染（建議使用甲基綠復(fù)染試劑盒)

12． 放上蓋玻片或封片

13． 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)棕褐色

注意事項(xiàng)

 

1． 本產(chǎn)品為10次操作

2． 操作時(shí)須戴手套，以防污染

3． 石蠟包埋前，組織切片須用1％多聚甲醛或常規(guī)固定液4℃條件下，固定16小時(shí)，否則造成樣品支離破碎

4． 清理液（Reagent F）50毫升置于小型染色缸里，可重復(fù)使用

5． 所有操作在室溫下進(jìn)行

6． 每次更換試劑溶液時(shí)，保持切片面基本晾干?？諝庵辛栏蔂顟B(tài)為沒(méi)有水滴，呈濕潤(rùn)狀態(tài)，可見反光

7． 試劑溶液在切片表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿切片表面

8． 細(xì)胞顯色，避免過(guò)度，密切目測(cè)觀察，控制時(shí)間

9． 細(xì)胞顯色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察

10． 本公司提供系列平滑肌細(xì)胞檢測(cè)試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰