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各種動(dòng)物外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒

規(guī)格： 200 mL/kit

保存： 本產(chǎn)品對(duì)光敏感，應(yīng)該室溫避光儲(chǔ)存，保質(zhì)期 2 年。無(wú)菌開(kāi)封后，保存于室溫。

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產(chǎn)品組成：

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操作步驟：(僅供參考)

客戶可依據(jù)血液樣本量大小，選擇適宜的分離方式：

分離方案一

1. 新鮮抗凝全血用 1XPBS 按 1:1 稀釋，在離心管中先加入 4mL 試劑 A，后將 2mL 試劑 C 沿管壁緩慢滴加（建議使用巴氏吸管并 45°傾斜試管）于試劑 A 之上，形成梯度界面，將懸液小心平鋪于分離液液面上方。注意分離液與樣本總體積不能超過(guò)離心管的三分之二，否則會(huì)影響分離效果。

2. 室溫條件下水平轉(zhuǎn)子 600-1000g，25-30minutes（血液體積越大所需離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，最佳分離條件需摸索，離心最大轉(zhuǎn)速不超過(guò) 1000g）。

3. 離心后，上層白膜層為單個(gè)核細(xì)胞層，下層白膜層為粒細(xì)胞層（受個(gè)體差異及分離條件影響，粒細(xì)胞層可能會(huì)存在不同程度的紅細(xì)胞污染）。

4. 吸取粒細(xì)胞層及其上方 1ml 左右分離液至新的離心管中，加入 10mL 細(xì)胞洗滌液洗滌細(xì)胞。250g，離心 10min（如有紅細(xì)胞污染可依據(jù)樣本體積加入適量紅細(xì)胞裂解液祛除污染）。

5. 棄上清，加入 10mL 細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心 10min。

6. 棄上清，重懸細(xì)胞備用。

分離方案二

1. 沉降去除紅細(xì)胞：取新鮮抗凝血與血液稀釋液（注射用生理鹽水或 1XPBS）及紅細(xì)胞沉降液按照 1:1:1 比例混勻，室溫下靜置 30-40min 后，可見(jiàn)紅細(xì)胞沉于試管底部，小心吸盡上清層（富含白細(xì)胞及血小板）用于后續(xù)細(xì)胞分離。

2. 樣本分離：在 15mL 離心管中先加入 4mL 試劑 A，后將 2mL 試劑 C 沿管壁緩慢疊加（45°傾斜試管）于試劑 A 之上，形成梯度界面，將懸液小心平鋪于分離液液面上方。

3. 離心后，上層白膜層為單個(gè)核細(xì)胞層，下層白膜層為粒細(xì)胞層（受個(gè)體差異及分離條件影響，粒細(xì)胞白膜層可能會(huì)出現(xiàn)顏色較淺的情況）。

4. 吸取粒細(xì)胞層及其上方 1ml 左右分離液至新的離心管中，加入 10mL 細(xì)胞洗滌液洗滌細(xì)胞。250g，離心 10min（如有紅細(xì)胞污染可依據(jù)樣本體積加入適量紅細(xì)胞裂解液祛除污染）。

5. 棄上清，加入 10mL 細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞，250g，離心 10min。

6. 棄上清，重懸細(xì)胞備用。

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注意事項(xiàng)：

A. 開(kāi)封前顛倒混勻，本分離液為無(wú)菌產(chǎn)品，為延長(zhǎng)分離液保存時(shí)間，請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌條件下啟封，避免微生物污染。

B. 分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫（18℃~25℃），如室內(nèi)溫度較低，可將分離液預(yù)熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會(huì)導(dǎo)致白膜層不清晰。

C. 血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血 2h 以內(nèi)），為保持中性粒細(xì)胞的活性，應(yīng)避免冷凍和冷藏。

D. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞，不可使用含 Ca、Mg 離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集，大大降低細(xì)胞得率及純度。

E. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁，影響分離效果。

F. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會(huì)影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間，摸索最佳的分離條件。

G. 如果要進(jìn)一步對(duì)分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，注意全程保持無(wú)菌操作，避免微生物污染。

H. 不同動(dòng)物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同，用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。