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菜鳥做ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的一些心得體會(huì)
閱讀：4086 發(fā)布時(shí)間：2013-8-6菜鳥ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)之標(biāo)本搜集
這個(gè)很要害呀！標(biāo)本搜集及保管的好壞，直接決議了試驗(yàn)?zāi)芊癯晒ΑＴ谒鸭瘶?biāo)本之前有必要考慮到試驗(yàn)對(duì)標(biāo)本搜集及保管的需求，這些需求對(duì)標(biāo)本中待測物質(zhì)穩(wěn)定性影響很大。以ELISA為例。ELISA檢測的通常是液態(tài)標(biāo)本，應(yīng)在搜集到新鮮標(biāo)本后當(dāng)即離心留取上清液1ml左右移入高溫滅菌過的1.5ml EP管中。這種標(biāo)本在4度保管48小時(shí)，-20度保管1個(gè)月，-80度保管6個(gè)月對(duì)檢測影響不大。
樣本通常都是怕重復(fù)凍融的，這樣會(huì)使蛋白降解，如需做預(yù)試驗(yàn)或需重復(fù)取用標(biāo)本時(shí)，應(yīng)在搜集時(shí)即分裝幾個(gè)EP管（管外注意用標(biāo)號(hào)筆標(biāo)記好，否則就會(huì)牛頭不對(duì)馬嘴了！）。不注意這些需求，即便試驗(yàn)做的再美麗也是瞎的，不大會(huì)出成果。
菜鳥ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)之實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備以及開始實(shí)驗(yàn)
.試驗(yàn)前的預(yù)備工作那是適當(dāng)?shù)闹匾?。要用到?00ul中槍頭、1000ul大槍頭、1.5ml EP管事前滅菌好是有必要的；屢次運(yùn)用的酶標(biāo)板框洗凈烘干。
100ul加樣槍及槍頭，1000ul加樣槍及槍頭，100ml量筒（洗凈并雙蒸水沖刷），500ml量杯（洗凈并雙蒸水沖刷，試驗(yàn)室沒有更小的了），雙蒸水100ml（稀釋洗滌液用），吹氣球，吸水紙（定性濾紙），試管架，避光濕盒，酶標(biāo)板框，定時(shí)器，膠帶，剪刀，棄物盒及廢液缸。
預(yù)備試驗(yàn)時(shí)進(jìn)入試驗(yàn)室即翻開37度恒溫箱讓它開端升溫，否則比及需求用時(shí)再翻開，你急它不急，它升溫需求時(shí)刻，能夠現(xiàn)已過了要溫育的時(shí)刻它才到達(dá)37度；樣品和試劑盒在室溫下平衡30分鐘以上。
ELISA試劑盒固化的抗體在底部，加樣時(shí)槍頭千萬不要碰究竟部；用不完整個(gè)試劑盒能夠分隔用，但分時(shí)必定不要摸底部，緣由同前。試驗(yàn)前佳自個(gè)寫一個(gè)操作進(jìn)程，把操作中注意事項(xiàng)寫明白。不要只看著試劑盒闡明書做，由于闡明書是把操作程序和注意事項(xiàng)分隔寫了，看不過來，別的闡明書上許多東西究竟寫的不具體，網(wǎng)上的經(jīng)歷參閱也要寫在操作進(jìn)程里，越具體越好；
通常一批標(biāo)本只會(huì)運(yùn)用有些試劑和微孔板，事前計(jì)算好需求的試劑量，分別用1ml注射器抽取比需求量多做3-5個(gè)標(biāo)本的試劑轉(zhuǎn)移到標(biāo)記好的1.5mlEP管中，注意1ml注射器不要混用，做到一劑一個(gè)注射器。別的顯色液B要避光，轉(zhuǎn)移時(shí)關(guān)燈，放的EP管用黑紙包?。?nbsp;
加樣槍的運(yùn)用：運(yùn)用前調(diào)整加樣槍加樣量（如我的ELISA試劑盒通常是50ul），吸試劑時(shí)按到有阻力感就行了，若是按究竟，加樣量必定超越槍上標(biāo)明的量了；打出試劑時(shí)按到有阻力感后持續(xù)下按究竟以便排盡槍頭中的試劑；加顯色劑B時(shí)要關(guān)燈而且敏捷，加好后用避光袋包住或放在避光濕盒中再孵育；加樣時(shí)盡量防止發(fā)生氣泡，如有氣泡成生，可用吹氣球吹破之；
每次孵育時(shí)用膠帶封住酶標(biāo)板口，防止水份蒸騰。微孔板通常是一排8個(gè)，在其一端排頭的邊際用記號(hào)筆標(biāo)記下次序（如1，2，3...），防止手藝洗板進(jìn)程中板朝下拍時(shí)不小心致微孔板掉出酶標(biāo)板框而無法承認(rèn)次序。
加標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)每次都要替換一個(gè)槍頭，防止重復(fù)運(yùn)用槍頭而穿插污染； 37度溫育后千萬不要忘掉倒掉微孔板中的液體（包括未結(jié)合上的酶聯(lián)親和物，其殘留必定形成假陽性），而且要重復(fù)用稀釋好的洗滌劑洗板；洗板能夠多洗幾回，沒壞處；
洗板可用50ml或20ml注射器針管+1ml注射器針頭抽洗滌液直接往微孔中沖刷，注意針頭安牢，否則壓力大時(shí)把針頭沖到微孔里劃到孔底，很多洗滌劑沖入就不好玩了。 應(yīng)做預(yù)試驗(yàn)和規(guī)范曲線，若是大都樣本測值在高OD值處動(dòng)搖，要稀釋后再重做，然后按稀釋倍數(shù)算出來終成果，因?yàn)樵噭┖惺怯袦y驗(yàn)規(guī)模的。