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技術(shù)文章

預(yù)制膠使用說明

閱讀:2562          發(fā)布時(shí)間:2015-5-26

本預(yù)制膠通過PH 中性緩沖液制備,可長期存放(室溫6 個(gè)月, 4℃一年),電泳及
轉(zhuǎn)膜緩沖液兼容傳統(tǒng)低成本的tris-glycine 緩沖液, 35-40 分鐘即可完成電泳,質(zhì)量穩(wěn)定,
即開即用。目前有膠濃度8%,10%,12%,15%,8%-16%梯度膠,4%-20%梯度膠供您選
擇,本預(yù)制膠兼容BIORAD,天能及北京六一的mini 膠電泳槽及其他任何膠板寬度在10cm
的電泳槽。
預(yù)制膠規(guī)格濃縮膠5%,丙烯酰胺與甲叉丙烯酰胺的比例29:1,凝膠厚度1mm,加樣孔數(shù),12 孔,
大上樣量25ul
電泳說明使用《分子克隆》的tris-glycine 電泳緩沖液(tris 25mM,glycine 250mM,SDS 0.1%,),
推薦使用低壓100v,15min 換高壓200v 跑膠35min。
轉(zhuǎn)膜說明使用《分子克隆》的tris-glycine 電轉(zhuǎn)緩沖液,操作與實(shí)驗(yàn)室原有操作*相同??蛻粢部?br>直接購買電泳轉(zhuǎn)膜通用緩沖液(無需添加甲醇,無需冰浴,但需添加20%乙醇,恒壓80v
電轉(zhuǎn)60min)
保存方法置于包裝盒中,室溫保存6 個(gè)月,4℃一年,整齊疊加平放,或整齊豎直放置。
使用簡介剪開包裝取出膠,撕去膠板底端橙色膠紙,將梳子平穩(wěn)緩慢拔出,將預(yù)制膠固定在電泳槽
中(若梳齒不直可用注射器針頭扶平),內(nèi)槽加滿緩沖液,外槽液面低于內(nèi)槽液面3-5mm,
電泳后取出膠板,用小螺絲刀沿左右兩板間的縫隙將兩板別開,掰開兩板,凝膠底端可能
仍夾在膠板縫隙中,可用螺絲刀將凝膠頂出。

注意事項(xiàng):
1. 電泳及電轉(zhuǎn)緩沖液建議使用新配置的緩沖液,試劑純度不夠,反復(fù)使用或長期放置過的
緩沖液會(huì)降低電泳效果。
2. 電泳前請(qǐng)務(wù)必撕去膠板底端的橙色膠紙。
3. 拔掉梳子后,如果偶爾出現(xiàn)膠齒不直的情況,可用注射器針頭將膠齒撥正。
4. 加樣時(shí)槍頭插入兩板間有可能將兩板別開造成漏樣,將附送的透明“V"型卡,卡在前后
兩板上方中央部位,可防止此情況發(fā)生,在整個(gè)電泳過程中“V"卡不必取出。
由于第2s代預(yù)制膠改進(jìn)了BIORAD的mini膠板兩側(cè)上端與硅膠墊接觸的凹陷結(jié)構(gòu),使其兼容
所有廠家的mini膠電泳槽。然而,這使得本預(yù)制膠對(duì)于BIORAD和天能的電泳內(nèi)外槽存在微
小泄露,可通過兩種方式解決本問題:一是內(nèi)槽加滿緩沖液,外槽液面加至距內(nèi)槽液面
3-5mm,從而可防止在電泳過程中內(nèi)槽液面逐步下降。另一種解決方式是將BIORAD的硅膠
封閉墊取出后反過來安裝,使其沒有凸起的平滑面朝外,從而防止漏液。

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