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人沙門氏菌（Salmonella）Elisa試劑盒說明書

Human Salmonella Elisa kit instructions
本試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè)范圍：96T/48T
一、使用目的：在使用本試劑盒時(shí)，用于測(cè)定人的血清、血漿及相關(guān)液體樣本中沙門氏菌（Salmonella）表達(dá)癥狀，暫不做臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)使用。
實(shí)驗(yàn)原理:應(yīng)用的原理方法是雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人沙門氏菌（Salmonella）表達(dá)癥狀。用純化的人沙門氏菌（Salmonella）抗體進(jìn)行包被微孔板后，制成固相抗體，可與樣品中沙門氏菌（Salmonella）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的沙門氏菌（Salmonella）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人沙門氏菌（Salmonella）的存在與否。
二、人沙門氏菌（Salmonella）Elisa試劑盒組成:
1.30 倍濃縮洗滌液   20ml*1瓶             7.終止液   6ml*1瓶
2.酶標(biāo)試劑          6ml*1瓶              8.陽性對(duì)照 0.5ml*1瓶
3.酶標(biāo)包被板        12孔*8條             9.陰性對(duì)照 0.5ml*1瓶
4.樣品稀釋液        6ml*1 瓶             10.說明書 1份
5.顯色劑A 液        6ml*1 瓶             11.封板膜 2張
6.顯色劑B 液        6ml*1/瓶             12.密封袋 1個(gè)
三、操作步驟:
1.編號(hào)：對(duì)應(yīng)微孔將樣品按序編號(hào)，每塊板上應(yīng)設(shè)定陰性對(duì)照2孔、陽性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔。
2.加樣：加樣時(shí)，分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。
3.溫育：用封板膜封板后，放在37℃水中溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：再一次用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
8.洗滌：再一次小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計(jì)算和結(jié)果判定：
臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為沙門氏菌（Salmonella）陽性
陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為沙門氏菌（Salmonella）陰性。
四、注意事項(xiàng)
1.操作過程應(yīng)嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，不同批號(hào)組不得混用。
2.從冷藏環(huán)境中取出試劑盒時(shí)，應(yīng)該在室溫平衡15到30分鐘以后，才可以進(jìn)行使用，酶標(biāo)包開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中低溫冷凍保存。
3.封板膜只限一次性使用。如一次未用完，應(yīng)舍棄封板膜，以避免交叉污染。
4.試驗(yàn)結(jié)果的鑒定一般以酶標(biāo)儀讀數(shù)為，在使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為630nm。
5.在處理廢物環(huán)節(jié)時(shí)，所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物的處理方法處理。終止液為2M 的硫酸，使用時(shí)必須注意使用安全。
6.人沙門氏菌Elisa試劑盒保存的條件及有效期:
  1.試劑盒保存溫度：2-8℃。
  2.有效期：6個(gè)月

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