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通用型 DNA 損傷彗星銀染檢測試劑盒產品說明書
閱讀：992 發(fā)布時間：2021-9-8| 提 供 商 | 上海哈靈生物科技有限公司 | 資料大小 | 142.9KB |
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主要用途
通用型 DNA 損傷彗星銀染檢測試劑是一種旨在采用組織細胞堿性凝膠電泳，在電場環(huán)境下，損傷變性的 DNA 片段遷移形成特定的形態(tài)，即 DNA 移動尾巴，來進行體外評價和半定量分析 DNA 損傷程度的 而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于新鮮動物細胞、組織、血液、骨髓 等樣品的 DNA 損傷研究，包括 DNA 鏈斷裂、氧化性堿基損傷、DNA 剪切損傷、DNA 交聯(lián)、DNA 修復等， 應用于環(huán)境和藥物毒理學、放射學、氧化應急反應等研究。產品嚴格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，操作簡 便，重復一致。
技術背景
彗星檢測技術（Comet assay），又稱為單細胞凝膠電泳檢測技術（single cell gel electrophoresis assay；SCGE） 或微凝膠電泳檢測技術（microgel electrophoresis assay），是基于變性切離的DNA片段，在電場的影響下， 從細胞中移出的原理，而完整的超螺旋DNA仍然保持在細胞核內。通過凝膠電泳，呈現(xiàn)出分子遷移圖形， 形成彗星拖尾（comet tail）現(xiàn)象，即完整DNA的細胞染色體為“頭"，而松散和斷裂的DNA為“尾"，以此評 價DNA損傷程度。這是分析單一細胞DNA鏈斷裂的敏感方法之一。其技術方法的基本步驟是：第一，細胞 固定包埋在凝膠里；第二，細胞裂解處理；第三，DNA變性處理；第四，電泳遷移；第五，染色和圖像分 析。由此觀察DNA遷移形態(tài)，進行體外檢測，成為細胞DNA損傷研究的基本手段。其中電泳條件將決定檢 測的敏感程度。堿性電泳（alkaline electrophoresis）為常規(guī)電泳檢測，可以檢測單鏈DNA斷裂、雙鏈DNA 斷裂、大部分無嘌呤核酸位點（apurinic site）和無嘧啶核酸位點（apyrimidic site）、堿不穩(wěn)定DNA結合物 （alkali-labile DNA adduct）等DNA損傷。
用戶自備 無離子水：用于稀釋電泳緩沖液 磨砂載玻片和蓋玻片：用于放置樣品進行微凝膠電泳的器材 電泳槽：用于微凝膠電泳的裝置 恒溫培養(yǎng)箱或恒溫水槽：用于孵育反應 1.5 毫升離心管：用于樣品操作的容器 90 mm 培養(yǎng)皿：用于樣品處理、染色等的容器 光學顯微鏡：用于觀察細胞彗星現(xiàn)象
注意事項 1． 本產品為 20 次操作 2． 操作時，須戴手套 3． 整個操作，建議在暗光下進行 4． 建議使用新鮮培養(yǎng)的動物細胞、組織、血液等；細胞量為 105細胞/毫升 5． 可以使用 100 微摩爾過氧化氫或 25 微摩爾高錳酸鉀冰上孵育 10 分鐘預處理樣品作為陽性對照 6． 電泳液（Reagent E）： 10 倍濃度為 3 摩爾 NaOH，10 毫摩爾 EDTA，pH 13.5 7． 凈化液（Reagent F）： 70%ETHANOL 8． 操作時小心輕柔，避免膠體脫位 9． 電泳溫度過高，會造成膠體脫位5 10．電泳時，電壓 25 伏為佳，建議控制電泳液量達到要求 11．細胞 DNA 損傷彗星圖像如下（400 倍）