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細胞培育實驗中合適的細胞培養(yǎng)基和血清怎樣選擇？
閱讀：1130 發(fā)布時間：2013-10-10
細胞培育實驗中合適的細胞培養(yǎng)基和血清怎樣選擇？
細胞培育是試驗室里常見和基本的實驗，但是不是簡單的。別以為細胞培育是一件簡單的事，這里也蘊藏著許多學問。有的時候細胞狀況不好的話，會導致轉(zhuǎn)染、藥篩這些實驗底子沒辦法做。影響細胞培育的因素有很多，我們先從培養(yǎng)基和血清開始說。
經(jīng)典的細胞培養(yǎng)基有很多種，例如Invitrogen（GIBCO）、Thermo Fisher（HyClone）、Sigma等公司都可以提供。DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是運用廣泛的。其他的例如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細胞的培育。
◆MEM是由Eagle’s基礎(chǔ)培育基（BME）開展而來的，其間添加了成分的規(guī)格及濃度。
◆Dulbecco改進的BEM（DMEM）培養(yǎng)基是專為小鼠成纖維細胞準備的，常用于貼壁細胞的培育。DMEM中氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，選用雙倍的HCO3-和CO2濃度可以起到十分好的緩沖效果。開端的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L，后來為了滿足某些細胞的成長需求，將葡萄糖含量調(diào)整為4500 mg/L，這就是我們常說的低糖和高糖了。
◆aMEM含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸，它可以廣泛用于各種細胞類型，包括對營養(yǎng)成分需求嚴苛的細胞。
◆Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而規(guī)劃的，如今也廣泛運用于克隆構(gòu)成率的剖析及原代培育。F12還能夠與DMEM等體積混合運用，得到一種高濃度與成分多元化相的產(chǎn)品，這種培養(yǎng)基已運用于許多原代培育及更難養(yǎng)的細胞系的培育。
◆RPMI 1640培養(yǎng)基是用于淋巴細胞培育的，如今已廣泛用于懸浮細胞的培育。
曾經(jīng)常常聽到有人問，這種細胞該用哪一種培養(yǎng)基呢?其實這個疑問的答案可以很簡單，也可以很復雜。若是這種細胞是購自ATCC或其他的細胞庫，那很簡單，問供貨商就行了?；?/span>參考有關(guān)的文獻。Invitrogen上有一個Cell Line Database的東西，也很好用。挑選你感興趣的細胞類型，它就會顯示相應(yīng)的培養(yǎng)基、血清和轉(zhuǎn)染試劑等，有時還有優(yōu)化好的轉(zhuǎn)染進程，很方便。Sigma上也有一個Media Expert，包括培養(yǎng)基一切成分的功用描繪、運用推介和參閱文獻等，它仍是一個解決問題的能手，關(guān)于細胞培育中的常見疑問，如細胞貼壁欠好、培養(yǎng)基變色等，它都會列出相應(yīng)的緣由，并提供解決的辦法。
如果你是準備樹立一種全新細胞的培育體系，并且找不到任何參閱，那你就得花時間自己實驗了。在MEM中培育的細胞，很能夠在DMEM或M199中成長。總之，MEM做貼壁細胞培育、RPMI 1640做懸浮細胞培育是一個好的開始。你也可以購買多種培養(yǎng)基，然后花大概兩周的時間先做一個比較簡單的細胞成長試驗，然后從中挑選合適的。
以前大多數(shù)實驗室都是用干粉培養(yǎng)基，但是制作的過程比較麻煩，需要溶解、調(diào)節(jié)pH值，過濾，在此過程中還會發(fā)生濃度誤差，而且有些實驗室的水質(zhì)并不抱負，所以培育的效果會有差別。如果使用液體培養(yǎng)基，這種人為的誤差會降低。可能你會覺得液體培養(yǎng)基比較貴，以前是這樣，但是現(xiàn)在不一樣了。HyClone和Invitrogen都在國內(nèi)建立了液體培養(yǎng)基的生產(chǎn)基地，生產(chǎn)和運輸的成本大大下降，所以如今的價格也比較便宜，比干粉培育基貴不了多少，而且還幫你省了過濾器和時間。
血清富含成長因子，可以推進細胞的繁衍，富含的附著因子可推進細胞的貼壁，一起還具有抗胰酶活性。血清也是礦物質(zhì)、脂類及激素的重要來源。常用的血清有小牛血清、重生牛血清、胎牛血清和馬血清等。牛血清是按照采血時間的早晚來分類的。采血時間越早，營養(yǎng)物質(zhì)越豐富，所含抗體也越少，因而胎牛血清適合需求高的細胞系和克隆化培育。由于瘋牛病的原因，到目前為止，中國政府依然制止從北美洲、歐洲和日本等地區(qū)進口牛血清，因此國內(nèi)市面上的牛血清大多來自澳洲、南美洲，或是國產(chǎn)的。
細胞培育實驗中合適的細胞培養(yǎng)基和血清怎樣選擇？