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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級會(huì)員·13年
40618ES05支原體qPCR檢測試劑盒（探針法）
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 40618ES05 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：717更新時(shí)間：2023-03-15 09:00:52
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- 網(wǎng)址：
- www.yeasen.com
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 40618ES05 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
MycAwayTM Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit 支原體qPCR檢測試劑盒（探針法） | 40618ES25 | 25 T | 3155 |
40618ES60 | 100 T | 10355 |
產(chǎn)品描述
MycAwayTM Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit 作為精確支原體檢測試劑盒，可用于確定如細(xì)胞庫、病毒種子、臨床治療用途的細(xì)胞和生物制品中是否存在支原體污染。本試劑盒采用熒光探針qPCR法技術(shù)，定性檢測待測樣本中支原體DNA，可覆蓋100多種支原體DNA序列；具備高靈敏、高特異、高效率、安全高等優(yōu)勢，嚴(yán)格按照EP2.6.7和JPXVII支原體檢測相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行驗(yàn)證。
本試劑盒包含內(nèi)部質(zhì)控（IC），可用來判斷待檢樣本中是否包含對擴(kuò)增反應(yīng)存在抑制的因素，從而達(dá)到防止假陰性結(jié)果的產(chǎn)生；內(nèi)部質(zhì)控（IC）也可在樣本提取階段加入，以評估提取效果。本試劑盒與支原體DNA提取純化試劑盒配套使用，高效提取樣本中的支原體DNA，檢測限可達(dá)到10 CFU/mL，最高靈敏度可達(dá)1 CFU/mL。
產(chǎn)品組分
編號(hào) | 組分 | 產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 | |
40618ES25 (25 T) | 40618ES60 (100 T) | ||
40618-A | 4×MyqPCR Reaction Buffer | 250 μL | 1 mL |
40618-B | MyPrimer&Probe MIX | 25 μL | 100 μL |
40618-C | 內(nèi)部質(zhì)控（IC） | 25 μL | 100 μL |
40618-D | 陽性質(zhì)控（PC） | 500 μL | 2 mL |
【注】：陽性質(zhì)控（PC）濃度為1000copies/µL。
運(yùn)輸儲(chǔ)存方法
干冰運(yùn)輸。-20℃保存，有效期一年。
注意事項(xiàng)
1）使用本試劑前請仔細(xì)閱讀本說明書，實(shí)驗(yàn)應(yīng)規(guī)范操作，包括樣本處理、反應(yīng)體系的配制及加樣。
2）加樣和配液步驟都盡量在冰上操作。
3）每個(gè)組分在使用前都應(yīng)震蕩混勻，低速離心。
4）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
5）本產(chǎn)品僅作科研用途。
適用機(jī)型
PRISM®7500Real-Time PCR System、QuantStudio™5（ABI）；CFX96（Bio-Rad）
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
一、待測樣本DNA提取
建議使用QIAGEN公司的QIAamp DNA Mini Kit提取樣本DNA。
二、qPCR反應(yīng)體系的準(zhǔn)備
1）根據(jù)所要檢測樣本的數(shù)量，計(jì)算所需反應(yīng)孔數(shù)，一般做2個(gè)重復(fù)孔。
反應(yīng)孔數(shù)=（1個(gè)陽性質(zhì)控PC+1個(gè)無模板對照NTC+N個(gè)待測樣本）×2
2）根據(jù)表1反應(yīng)體系，將所需試劑放冰上融化。
3）根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計(jì)算所需要的qPCR Mix的量。
Mix=（反應(yīng)孔數(shù)+2）*（10+1+1+8）（包含加樣損失）
表1 反應(yīng)體系（以40 μL為例）
組分 | 單孔體積（μL） | 終濃度 |
4× MyqPCR Reaction Buffer （40618-A) | 10 | 1× |
待測樣本DNA/陽性質(zhì)控 | 20 | |
MyPrimer&Probe MIX (40618-B) | 1 | 0.4 μM |
IC (40618-C) | 1/0* | |
超純水 | Up to 40 | |
Total | 40 |
【注】：1）為保證實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性，40618-A、40618-B組分需儲(chǔ)存于-20℃。
2）為減少反復(fù)凍融次數(shù)和避免污染，建議初次使用時(shí)將40618-C、40618-D分裝儲(chǔ)存于-80℃。
3）qPCR Mix配制過程不加待測樣本DNA與陽性質(zhì)控。
4）1/0代表NTC反應(yīng)孔中是否添加IC，使用試劑盒時(shí)建議加上IC，可以更好的確認(rèn)體系是否配置正確。若不加，結(jié)果判斷請參照結(jié)果分析提示。
三、加樣
1）充分震蕩混勻qPCR Mix，低速離心，將管蓋殘留液體收集至管底。
2）向每孔反應(yīng)管中分裝20μL qPCR Mix。
3）向已分裝過qPCR Mix的反應(yīng)管中加入樣品，示例如下：
表2 加樣示例
待測樣本DNA | 20 μL qPCR Mix+20 μL 待測樣本DNA |
NTC對照 | 20 μL qPCR Mix+20 μL DNA Elution Buffer （或者ddH2O） |
陽性質(zhì)控（PC） | 20 μL qPCR Mix +20 μL 陽性質(zhì)控 |
【注】：此時(shí)每個(gè)反應(yīng)孔的體積為40μL
4）蓋上反應(yīng)管蓋子或者貼上光學(xué)膜，為避免影響熒光信號(hào)讀取，請注意不要在管蓋或者膜上做標(biāo)記，或者用刮板反復(fù)摩擦。
5）反應(yīng)管短時(shí)低速離心，將管壁液體收集至管底；充分震蕩混勻后，再短時(shí)低速離心，將管蓋和管壁的殘留液體收集至底，如有氣泡，需將氣泡排盡。
qPCR程序參數(shù)設(shè)置
1、創(chuàng)建目的通道探針：
創(chuàng)建目的通道的FAM探針，選擇報(bào)告熒光基團(tuán)為FAM，猝滅熒光基團(tuán)為none；
創(chuàng)建IC 通道的VIC探針，選擇報(bào)告熒光基團(tuán)為VIC，猝滅熒光基團(tuán)為none；
選擇檢測參比熒光為ROX（可選擇，試劑盒中不含）。
2、標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增程序：
反應(yīng)階段 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) | |
1 | 預(yù)變性 | 95℃ | 5 min | 1 |
2 | 擴(kuò)增反應(yīng) | 95℃ | 15 sec | 45 |
62℃* | 30 sec |
【注】：* 熒光信號(hào)采集。
結(jié)果分析
1、PC、NTC結(jié)果判斷:
質(zhì)控樣本 | FAM 信號(hào) | VIC 信號(hào) |
PC | Ct<40 ,且有明顯的擴(kuò)增曲線。 | Ct<40 ,且有明顯的擴(kuò)增曲線。 |
NTC | Ct≧40 ,或無明顯的起峰。 | Mix 中添加內(nèi)參IC ，Ct<40 ,且有明顯的擴(kuò)增曲線。 |
Ct≧40 ,或無明顯的起峰。 | Mix 未添加內(nèi)參IC ，Ct≧40 ,或無明顯的起峰。 |
2、待測樣本檢測結(jié)果判定：
FAM 信號(hào) | VIC 信號(hào) | 結(jié)果判斷 |
Ct<40 ,且有明顯的擴(kuò)增曲線 | Ct<40 ,且有明顯的擴(kuò)增曲線 | 陽性 |
Ct≧40 ,或無明顯的起峰 | 有抑制 | |
Ct≧40 ,或無明顯的起峰 | Ct<40 ,且有明顯的擴(kuò)增曲線 | 陰性 |
Ct≧40 ,或無明顯的起峰 | 有抑制 |
【注】：*VIC信號(hào)如果有抑制，需重測或?qū)颖具M(jìn)行合適處理消除抑制因子
HB220112
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