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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·13年
T7 RNA Polymerase（250 U/μL）
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：308更新時(shí)間：2025-02-07 13:52:49
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10ku |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 10626ES10 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
T7 RNA Polymerase（250 U/μL） | 10626ES10 | 10 KU | 1,875.00 |
10626ES60 | 100 KU | 11,265.00 |
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品是大腸桿菌重組表達(dá)來(lái)源的噬菌體T7 RNA聚合酶，以含有T7啟動(dòng)子序列（5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’）的雙鏈DNA為模板，以NTP為底物，合成與啟動(dòng)子下游的反向單鏈DNA互補(bǔ)的RNA。雙鏈線性平末端或5’突出末端DNA均可作為T7 RNA聚合酶的底物模板，因此線性質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物均可用作體外合成RNA的模板。
注：G*為RNA轉(zhuǎn)錄的第一個(gè)堿基。
產(chǎn)品性質(zhì)
來(lái)源（Source） | 重組E. coli |
最適溫度（Optimum Temperature） | 37℃ |
宿主核酸殘留（Host Nucleic acid Residue） | <10 fg/U |
宿主蛋白殘留（Host Protein Residue） | <50 ppm |
RNA酶殘留（RNase Residue） | 陰性 |
儲(chǔ)存緩沖液（Storage Buffer） | 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0.1% Triton X-100，50%（v/v）甘油，pH7.9@25℃ |
活性單位定義（Unit Definition） | 在 37℃、pH8.0 的條件下，1 h內(nèi)使 1 nmol 的 [3H] GMP 摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位。 |
【注】：具體產(chǎn)品質(zhì)檢數(shù)據(jù)及更多指標(biāo)請(qǐng)查看批次質(zhì)檢報(bào)告。
產(chǎn)品組分
組分編號(hào) | 組分名稱 | 產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格 | |
10626ES10 (10 KU) | 10626ES60 (100 KU) | ||
10626-A | T7 RNA polymerase (250 U/μL) | 40 μL | 400 μL |
10626-B | 10×Transcription Buffer | 500 μL | 1 mL×5 |
【注】：10×Transcription Buffer中含460 mM MgCl2和100 mM DTT，但不含有NTP，如需請(qǐng)購(gòu)買本翌圣產(chǎn)品Cat#10133。
產(chǎn)品應(yīng)用
1. 單鏈 RNA合成（包括mRNA，siRNA，gRNA等各類RNA前體，以及同位素標(biāo)記或非同位素標(biāo)記的RNA探針）。
2. 以（Cap analog）為引物合成Capped mRNA。
運(yùn)輸和保存方法
干冰運(yùn)輸。-20℃保存，有效期一年。
注意事項(xiàng)
1. DNA模板的種類：推薦使用含T7啟動(dòng)子的線性化質(zhì)粒和PCR產(chǎn)物作為模板。
2. 轉(zhuǎn)錄模板的純度會(huì)顯著影響體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。在質(zhì)粒DNA抽提過(guò)程中殘留的RNase A會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)錄RNA的質(zhì)量。通過(guò)酚-氯仿抽提的質(zhì)粒DNA為最佳模板；PCR產(chǎn)物建議采用膠回收純化后使用。
3. 在20 μL反應(yīng)體系中加入0.02 U熱穩(wěn)定無(wú)機(jī)焦磷酸酶可顯著提高轉(zhuǎn)錄產(chǎn)量。
4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
應(yīng)用實(shí)例
按下列體系配制反應(yīng)體系
組分 | 體積（μL） | 終濃度 |
10×Transcription Buffer (Mg2+ Plus) | 2 | 1× |
CTP/GTP/ATP/UTP (100 mM each) | 0.4 each | 2 mM each |
T7 RNA Polymerase (250 U/μL) | 0.8 | - |
RNase inhibitor (40 U/μL) | 1 | - |
RNase free H2O | Up to 18 | - |
模板DNA | 2 (100 ng-1μg) | - |
注： 1) DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亞精胺，亞精胺濃度過(guò)高會(huì)引起DNA模板沉淀。
2) Buffer和水建議放置到室溫，然后開始使用，反應(yīng)于室溫下配制，防止溫度低引起亞精胺沉淀高濃度DNA模板。
3) 若轉(zhuǎn)錄長(zhǎng)度< 100 nt，模板投入量可增加至2 μg。
4) RNase inhibitor (40 U/μL)請(qǐng)購(gòu)買翌圣產(chǎn)品Cat#10603。
5) 為了特定區(qū)域的有效轉(zhuǎn)錄，建議在其區(qū)域下游把模板DNA預(yù)先切成平端或5′突出末端。
2. 在37℃下反應(yīng)1-2 h（若轉(zhuǎn)錄長(zhǎng)度≤ 100 nt，增加時(shí)間至4-8 h）。
3. 反應(yīng)結(jié)束后，使用2 U DNaseⅠ（無(wú)RNase）37℃、15 min去除DNA模板。
4. 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物純化：體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可選用RNA Cleaner磁珠進(jìn)行純化（翌圣產(chǎn)品Cat#12602），以去除蛋白、鹽離子和其他雜質(zhì)。也可以采用酚/氯仿純化法（具體操作步驟可聯(lián)系翌圣索?。?。
HB220325
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