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初級(jí)會(huì)員·13年
40721ES50活細(xì)胞示蹤劑CMFDA（綠色）
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 40721ES50 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：447更新時(shí)間：2022-05-08 19:33:04
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50ug |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 40721ES50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） | *（元） |
CellTracker Green CMFDA (5-Chloromethylfluorescein Diacetate) 活細(xì)胞示蹤劑CMFDA（綠色） | 40721ES50 | 50μg | 575.00 | 549.00 |
40721ES60 | 2×50μg | 895.00 | 860.00 | |
40721ES72 | 5×50μg | 1565.00 | / |
產(chǎn)品描述
CMFDA，英文全稱5-chloromethylfluorescein diacetate，是一種可自由透過(guò)活細(xì)胞膜對(duì)細(xì)胞進(jìn)行示蹤的熒光染料。
CMFDA是二乙酸熒光素（Fluorescein diacetate，F(xiàn)DA）的氯甲基衍生物，具細(xì)胞膜滲透性，不具有熒光發(fā)光性。當(dāng)通過(guò)被動(dòng)運(yùn)輸穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活細(xì)胞后，CMFDA中的親脂性基團(tuán)可被胞漿內(nèi)非特異性酯酶水解，生成5-氯甲基熒光素（5-chloromethylfluorescein）；5-氯甲基熒光素可發(fā)出綠色熒光， 因帶電荷而不能自由穿透細(xì)胞膜，并利用自身氯甲基與細(xì)胞內(nèi)蛋白和多肽中的谷胱甘肽在谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶作用下生成加合物，能完好的保留在胞內(nèi)。經(jīng)CMFDA標(biāo)記的細(xì)胞，熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時(shí)間可達(dá)數(shù)天（至少3天），因此非常適用于細(xì)胞分化和形態(tài)發(fā)生等研究。與常用的鈣黃綠素和FDA相比，具有較長(zhǎng)時(shí)間的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)保留特點(diǎn)。
在細(xì)胞分裂增殖過(guò)程中，CMFDA標(biāo)記熒光可分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，且具有不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色的功能（有極少情況下通過(guò)細(xì)胞間縫隙連接發(fā)生染色）。同時(shí)，CMFDA標(biāo)記熒光還主要用于分析細(xì)胞間融合、細(xì)胞粘附及多藥耐藥轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的研究。此外，CMFDA還可用于與其他細(xì)胞示蹤染料聯(lián)合選擇性標(biāo)記感染細(xì)胞內(nèi)的病原菌；與膜不通透性核熒光探針共同使用，可用于細(xì)胞活性研究。
本品具有細(xì)胞示蹤試劑理想的特性：穩(wěn)定、無(wú)毒（工作濃度范圍內(nèi)）、細(xì)胞內(nèi)熒光保留性好、強(qiáng)熒光（生理pH范圍內(nèi)）。CMFDA標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，Ex=492 nm，Em=517 nm，可與其他顏色熒光染料，如紅色熒光蛋白(red fluorescent protein，RFP）等共染。本品以粉末形式提供，需用DMSO制備儲(chǔ)存液后再使用。
產(chǎn)品性質(zhì)
中文名稱（Chinese Synonym） | 5-氯甲基熒光素二醋酸酯 |
英文名稱（English Synonym） | 5-chloromethylfluorescein diacetate |
CAS號(hào)（CAS NO.） | 136832-63-8 |
分子式（Molecular Weight） | C25H17ClO7 |
分子量（Molecular Fomular） | 464.85 |
外觀（Appearance） | 白色或類白色固體 |
Ex/ Em | 492/517 nm |
結(jié)構(gòu)式（Structure） | |
運(yùn)輸與保存方法
室溫運(yùn)輸。-20℃干燥避光保存，有效期一年。避免反復(fù)凍融。
注意事項(xiàng)
1. 不同的細(xì)胞其細(xì)胞內(nèi)酯酶活性不同，因此染色效果具有差異性。
2. 熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，染色過(guò)程需盡量避光。
3. 避免使用含有巰基的緩沖液。
4. 為了您的健康，實(shí)驗(yàn)操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服和帶一次性手套。
5. 本產(chǎn)品僅作科研用途！
操作方法
1. CMFDA儲(chǔ)存液（10 mM）的配制
將本品取出回溫至室溫。用10.8 µL DMSO溶解50 µg CMFDA，充分混勻即得到10 mM的儲(chǔ)存液。第一次使用時(shí)，建議母液現(xiàn)配現(xiàn)用。且溶解后的試劑盡可能在短時(shí)間內(nèi)使用，以保證實(shí)驗(yàn)效果。母液遇水極易分解，若單次不能用完，建議分裝保存，用封口膜封口，并嚴(yán)格做到≤-20℃密封干燥保存?！?/span>避免反復(fù)凍融】
【注】： ① 本品容易吸潮，從冰箱取出后，請(qǐng)確認(rèn)在干燥的環(huán)境放至室溫后再開(kāi)封。由于試劑極其微量，開(kāi)封前請(qǐng)將其短暫離心，以保 證粉末落入管底。
② 所用DMSO必須保證高質(zhì)量，新鮮無(wú)水，否則將會(huì)導(dǎo)致醋酸酯水解，使熒光染料無(wú)法進(jìn)入細(xì)胞，影響實(shí)驗(yàn)效果。
③ 建議您在正式實(shí)驗(yàn)前先摸索一下細(xì)胞量、熒光探針的終濃度、培養(yǎng)時(shí)間等，找到最佳實(shí)驗(yàn)條件。
2. CMFDA工作液（0.5-5 µM）的配制
使用前用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋上述儲(chǔ)存液至工作液濃度（0.5-25 µM），并將探針工作液于37℃預(yù)熱。
【注】：針對(duì)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康乃璧墓ぷ饕簼舛炔煌?，需根?jù)具體情況進(jìn)行優(yōu)化。一般來(lái)講：對(duì)于長(zhǎng)期染色（至少3天）或快速分裂細(xì)胞的染色，推薦工作液濃度5-25 µM。對(duì)于短期染色，如細(xì)胞活力分析等實(shí)驗(yàn)，推薦工作液濃度0.5-5 µM。為避免過(guò)度加載造成細(xì)胞毒性，維持正常的細(xì)胞生理活性，建議在取得有效結(jié)果的基礎(chǔ)上盡量使用低探針濃度。
3. 染色方法
3.1 懸浮細(xì)胞染色
1）離心收集細(xì)胞，并吸除上清。用預(yù)熱的探針工作液輕柔地重懸細(xì)胞。
2）于細(xì)胞正常生長(zhǎng)條件下孵育15-45 min。
3）離心并去除探針工作液。
4）換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)30 min。
5）清洗細(xì)胞，如需固定請(qǐng)參考如下步驟【4.固定和通透處理】。
3.2 貼壁細(xì)胞的染色
1）吸除培養(yǎng)液。
2）輕輕加入預(yù)熱的探針工作液。
3）于細(xì)胞正常生長(zhǎng)條件下孵育15-45 min。
4）換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)30 min。
5）清洗細(xì)胞，如需固定，請(qǐng)參考后續(xù)步驟【4.固定和通透處理】。
4.（可選）固定和通透處理
4.1 固定前，細(xì)胞需用PBS充分清洗。
【注】：當(dāng)細(xì)胞包被在含有巰基或蓋玻片表面上時(shí)，該清洗步驟尤為重要。
4.2 用3.7%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞15 min。
4.3 固定后于PBS中漂洗細(xì)胞。
4.4 （可選）后續(xù)如進(jìn)行其他抗體染色，需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行通透處理，可將上述處理的細(xì)胞于預(yù)冷的丙酮中孵育10 min。
5 鏡檢
將上述處理的細(xì)胞用PBS漂洗后，進(jìn)行檢測(cè)。該探針呈綠色熒光，其Ex=492 nm，Em=517 nm。
HB220418
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