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產(chǎn)品簡介

天然蛋白L（Protein L）是從馬格努斯消化鏈球菌分離出來的能和免疫球蛋白特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)，分子量為36 KD。本產(chǎn)品使用的是基因改造后的蛋白L ，既保留了與抗體k鏈結(jié)合的特性，同時也不會影響抗體的抗原結(jié)合位點。與 protein A 和 Protein G 相比，Protein L 更能廣泛地結(jié)合各種來源及亞類的抗體，包括人、小鼠、大鼠、兔和雞，但不結(jié)合牛、山羊或綿羊來源的免疫球蛋白。

rProtein L Agarose Resin 4FF是用于分離和純化單克隆抗體的通用性親和層析介質(zhì)，產(chǎn)品以高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，重組Protein L為配基，具有很高的物理化學(xué)穩(wěn)定性，可以在相對較高的流速下進(jìn)行抗體的純化，適用于工業(yè)客戶。利用本產(chǎn)品經(jīng)過一步親和層析，可從腹水、血清和培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體，使用方便，應(yīng)用廣泛。

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品性質(zhì)

儲存條件

2~8℃保存，有效期2年。

需準(zhǔn)備試劑

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾除菌。

平衡/洗雜緩沖液：0.15 M NaCl，20 mM Na2HPO4，pH 7.0

洗脫緩沖液：0.1 M甘氨，pH 3.0

中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5

使用說明

【注】上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強(qiáng)度和pH值，可以用平衡/洗雜緩沖液對血清樣品、腹水或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋，或者樣品用平衡/洗雜緩沖液透析。樣品在上樣前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質(zhì)以防阻塞柱子。

1. rProtein L Agarose Resin 4FF的裝填（以各種中壓色譜層析柱的裝填為例）

1）用去離子水沖洗層析柱底篩板與接頭，確保柱底篩板上無氣泡，關(guān)閉柱底出口，并在柱底部留出1-2 cm的去離子水。

2）將樹脂懸浮起來，小心的將漿液連續(xù)地倒入層析柱中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產(chǎn)生。

3）如果使用儲液器，應(yīng)立即在層析柱和儲液器中加滿水，將進(jìn)樣分配器放置于漿液表面，連接至泵上，避免在分配器或進(jìn)樣管中產(chǎn)生氣泡。

4）打開層析柱底部出口，開起泵，使其在設(shè)定的流速下進(jìn)行。最初應(yīng)讓緩沖液緩慢流過層析柱，然后緩慢增加至最終流速， 這樣可避免液壓對所形成柱床的沖擊，避免柱床形成的不均勻。如果達(dá)不到推薦的壓力或流速，可以用所使用泵的最大流速，這樣也可以得到一個很好的裝填效果。

【注】在隨后的色譜程序中，不要超過最大裝柱流速的75%，當(dāng)柱床高度穩(wěn)定后，在最后的裝柱流速下至少再上3倍柱床體積的去離子水。標(biāo)上柱床高度。

5）關(guān)閉泵，關(guān)閉層析柱出口。

6）如果使用儲液器，去除儲液器，將分配器至于層析柱中。

7）將分配器推向柱子至標(biāo)記的柱床高度處。允許裝柱液進(jìn)入分配器，鎖緊分配器接頭。

8）將裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統(tǒng)中，開始平衡。如果需要可以重新調(diào)整分配器。

2. 樣品純化

1）平衡：用5倍柱體積的平衡Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。

2）上樣：將樣品加到平衡好的rProtein L Agarose Resin 4FF中，保證目的蛋白與樹脂充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測。

【注】樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少，也會導(dǎo)致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過柱子的結(jié)合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進(jìn)樣器更難使用。

3）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗，直到紫外吸收達(dá)到一個穩(wěn)定的基線，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液，待檢測。

4）洗脫：使用5-10倍柱體積的洗脫Buffer，收集洗脫液，即目的蛋白組分。 

5）清洗及保存：依次使用3倍柱體積的平衡Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被細(xì)菌污染。

3. SDS-PAGE檢測

將純化過程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進(jìn)行檢測，判定其純化效果。

4. 樹脂清洗

rProtein L Agarose Resin 4FF可以重復(fù)使用而無需再生，但隨著一些變性物質(zhì)的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量下降，影響柱子的性能，這時需對柱子進(jìn)行清洗：

1）去除沉淀或變性物質(zhì)

用2倍柱體積的6 M 鹽酸胍溶液進(jìn)行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH 7.4 清洗。

2）去除由于疏水性吸附造成的非特異吸附物質(zhì)

用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH 7.4 清洗。

注意事項

1.請勿冷凍保存本產(chǎn)品。

2.rProtein L Agarose Resin 4FF使用前一定要充分顛倒若干次，使瓊脂糖珠混合均勻。

3. 所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。

4. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

附表  常見問題與解答

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