目錄:北京博蕾德科技發(fā)展有限公司>>Diaclone>>ELISA Kit>> 人 IL-33 ELISA 試劑盒
| 供貨周期 | 兩周 | 規(guī)格 | 96T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 873.020.096 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 用于體外定量檢測人血清,血漿，緩沖液或細(xì)胞培養(yǎng)液中的白介素33 |
Human IL-33 ELISA Kit
用途：人IL-33 ELISA試劑盒用于體外定量檢測人血清，血漿，緩沖液或細(xì)胞培養(yǎng)液中的白介素33,試劑盒可用于檢測天然和重組的人IL-33,此試劑盒只用于科研，不能用于診斷。
檢測原理：
IL-33試劑盒應(yīng)用的是夾心法固相酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）。IL-33特異單克隆抗體被包被于微孔板上，已知IL-33濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的樣品可在此反應(yīng)孔中進(jìn)行檢測。先將IL-33抗原和生物素標(biāo)記IL-33特異單克隆抗體同時(shí)孵育。洗滌后加入親和素過氧化物酶，孵育后洗去未結(jié)合的酶。其后加入底物，產(chǎn)生顏色反應(yīng)，顏色的深淺與樣品中IL-33的濃度成一定的比例關(guān)系。
試劑盒組成及配制：
試劑（2-8℃保存） | 1x96孔的配置 產(chǎn)品編號：#873.020.096 |
配制 |
96T微孔板 | 1 | 即用型(已包被) |
塑料板蓋 | 2 | |
標(biāo)準(zhǔn)品：1000pg/ml | 2瓶 | 按瓶上的說明稀釋（見試劑制備，） |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 | 1瓶（25ml） | 10X濃度，用純水稀釋 |
生物素標(biāo)記IL-33抗體 | 1瓶(0.4ml) | 用生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋（見試劑制備） |
生物素標(biāo)記抗體稀釋液 | 1瓶(7.5ml) | 即用型 |
親和素-HRP | 2瓶(5ul) | 0.5ml HRP稀釋液預(yù)稀釋（見試劑制備，） |
HRP稀釋液 | 1瓶(23ml) | 即用型 |
洗滌緩沖液 | 1瓶(10ml) | 200x，蒸餾水稀釋（見試劑制備） |
TMB | 1瓶(11ml) | 即用型 |
H2SO4終止液 | 1瓶(11ml) | 即用型 |
自備材料：
蒸餾水；加樣器：10ul, 50ul, 100ul, 200ul, 1000ul; 漩渦振蕩器和磁力攪拌器
保存條件：
試劑盒保存于2-8度，
洗滌緩沖液：制備好后，2-8度可保存1周以上
標(biāo)準(zhǔn)品：制備好后即用，不要保存。
生物素標(biāo)記二抗：制備好后即用，不要保存。
親和素-HRP: 制備好后即用，不要保存。
樣品收集，處理和保存：
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：1000xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
2. 血清——操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000xg離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
3. EDTA，檸檬酸鹽和肝素血漿可用于檢測。1000Xg離心30分鐘去除顆粒。
4. 如果樣品不直接使用，將其分為小部分（250-500ul）-70℃下保存，避免反復(fù)凍融。
如果可能，不要使用溶血和高脂血。如果血清中有大量的顆粒，檢測前先離心或過濾。
注意：不要在37℃或56℃加熱解凍。在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍
檢測程序
使用前，將所有試劑充分混合，不要使液體產(chǎn)生泡沫。根據(jù)樣品數(shù)量加上空白，標(biāo)準(zhǔn)品決定所需的板條，每個(gè)樣品，標(biāo)準(zhǔn)品，空白和質(zhì)控都應(yīng)做雙份。
詳細(xì)步驟 | |
1 | 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線 |
2 | 按實(shí)驗(yàn)方案在對應(yīng)孔加入100ul標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，標(biāo)準(zhǔn)品，樣本及空白孔均做復(fù)孔。 |
3 | 用塑料膜封板，室溫（18-25.℃）孵育2小時(shí) |
4 | 去掉封板膜，按以下程序洗板： a. 吸出孔內(nèi)液體。 b. 每孔加入300ul1X的洗滌緩沖液 c. 吸出孔內(nèi)液體 d. 重復(fù)步驟b和c兩次 |
5 | 加入50ul生物標(biāo)記的IL-33抗體到各孔 |
6 | 用封板膜，封板，室溫（18-25.℃）孵育1小時(shí) |
7 | 重復(fù)步驟4 |
8 | 加入100ul親和素-HRP溶液到各孔 |
9 | 用塑料膜封板，室溫（18-25.℃）孵育30min |
10 | 重復(fù)步驟4 |
11 | 加入100ul即用型TMB底物溶液至各孔 |
12 | 室溫避光孵育5-15min，用鋁箔包住反應(yīng)板， 避免光照。 |
13 | 加入100ul H2SO4到各孔，終止反應(yīng)。 |
在分光光度計(jì)中讀取結(jié)果。450nm作為初始波長，620nm作為參考波長。 | |
結(jié)果分析
以吸光度為Y軸，相應(yīng)的IL-33標(biāo)準(zhǔn)品濃度為X軸做標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品的IL-33含量可根據(jù)其O.D.值由標(biāo)準(zhǔn)曲線推斷出來。
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