 |
桂寧（上海）實驗器材有限公司
主營產(chǎn)品： Acroedge,Asahi |
聯(lián)系電話
4009202386
公司信息
- 聯(lián)系人：
- 市場部
- 電話：
- 4009202386；021-59169693
- 手機：
- 15317727424,18016316889
- 傳真：
- 021-51685596
- 地址：
- 上海市普陀區(qū)祁連山南路2888號耀光中環(huán)國際大廈B座701
- 郵編：
- 201507
- 個性化：
- www.omnilab.com.cn
- 網(wǎng)址：
- www.omnilab.com.cn
化學發(fā)光底物的作用
2013-12-15 閱讀(4719)
當?shù)孜锇l(fā)生化學反應而產(chǎn)生的能量以光的形式釋放出來的時候，我們稱這個過程為化學發(fā)光。魯米諾（luminol）是zui常用的化學發(fā)光試劑之一，被過氧化物氧化后它會產(chǎn)生一種激發(fā)態(tài)的產(chǎn)物——aminophthalate。這種產(chǎn)物衰變至低能態(tài)的同時釋放出光子。添加物可以提高魯米諾反應的發(fā)光強度和持續(xù)時間以及靈敏度。
化學發(fā)光底物被廣泛使用是因為其具有其他檢測方法不具備的優(yōu)點，這些優(yōu)點使得化學發(fā)光成為大多數(shù)蛋白實驗室的檢測方法。使用化學發(fā)光可以通過多次曝光獲得的成像結果。還可以將檢測試劑*去除，再對其他目的蛋白進行檢測并成像，或對檢測條件進行優(yōu)化。具有很寬的線性響應范圍，從而可以檢測并定量很寬濃度范圍的蛋白質。zui重要的是，化學發(fā)光在所有的檢測方法中具有zui高的靈敏度。使用辣根過氧化物酶標記的抗體和G-Biosciences公司的femtoLUCENT™ PLUS （貨號 # 786-003），可以檢測的下限為飛克級，而這得益于這種底物中的增強劑可以很大程度地增強發(fā)光強度并提高靈敏度。
化學發(fā)光底物與其他底物不同之處在于只有在酶和底物發(fā)生反應的時候才會產(chǎn)生瞬時的可被檢測的光。這與那些可產(chǎn)生穩(wěn)定有顏色產(chǎn)物的底物不同；些有顏色的沉淀在酶-底物反應結束之后仍然存在于膜上。在化學發(fā)光免疫印跡中，底物是反應限制試劑。一旦其耗盡，光就會逐漸變弱并消失。實驗中一定要使用適當稀釋濃度的抗體，這樣才會在幾小時內產(chǎn)生穩(wěn)定的光信號輸出，從而維持蛋白檢測的一致性和靈敏度。當抗體沒被足夠稀釋時，永遠不會獲得穩(wěn)定的光信號輸出。系統(tǒng)中太多的酶會快速氧化底物并終止信號。
化學發(fā)光，魯米諾在HRP和雙氧水存在的條件下會被氧化形成激發(fā)態(tài)的產(chǎn)物（3-aminophthalate）。3-aminophthalate在衰變至基態(tài)的過程中會發(fā)出波長為425nm的光。
femtoLUCENT™ PLUS
化學發(fā)光的優(yōu)點
靈敏性 | •強信號，低背景 •只需很少的抗原和抗體 |
快速 | •印跡上快速的底物處理 •信號在幾秒鐘之內產(chǎn)生 |
穩(wěn)定 | •與放射性同位素不同，存放期很長 •4oC儲存 |
硬拷貝結果 | •用X光膠片捕獲結果 •結果不會隨時間而褪色，不用擔心膜的破裂 •*保存 |
膠片結果 | •信號隨曝光時間增強而增強 •可選擇在不同時間曝光 •可優(yōu)化顯色的方法 |
印跡可重新檢測 | •非同位素標記的探針可從膜上洗掉 •可重復進行免疫檢測 |
寬線性范圍 | •可檢測很寬范圍的蛋白濃度 |
可定量 | •可用反射型顯象密度計或成像設備 （例如CCD相機）掃描X光膠片 |
