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美國伯樂羥基磷灰石與氟代磷灰石層析

分離機(jī)理:

羥基磷灰石 (Ca5(PO4)3OH2) 和氟代磷灰石 (Ca10(PO4)6F2) 是磷酸鈣的一種形式，具有獨te的選擇性和分辨率，經(jīng)常能分離一些其它層析和電泳技術(shù)無法區(qū)分的蛋白質(zhì)，是唯yi直接用于蛋白質(zhì)和核酸純化的無機(jī)層析介質(zhì)，高度耐堿，生物安全性最高。其中 PO₄^3-離子與帶正電的蛋白質(zhì)以離子鍵結(jié)合，具有陽離子交換特性，可由 NaCl 濃度梯度或磷酸鈉濃度梯度洗脫 ( 左圖 )，其中的 Ca²⁺離子與帶負(fù)電蛋白質(zhì)的自由羧基以金屬螯合方式結(jié)合，該結(jié)合方式對 NaCl 不敏感，可由磷酸鈉濃度梯度洗脫 ( 中圖 )。因此該介質(zhì)既可以用磷酸鈉單梯度洗脫，也可以采用 NaCl 梯度洗脫后以低濃度磷酸鈉緩沖液平衡，再以磷酸鈉濃度梯度洗脫的雙梯度洗脫模型，從而達(dá)到更高的分辨率和更好的分離效果 ( 右圖 )。

羥基磷灰石類型選擇:

對于羥基磷灰石，伯樂提供Bio-rad CHT陶瓷羥基磷灰石和 Bio-gel 晶體羥基磷灰石兩種介質(zhì)，陶瓷化形式是由晶體羥基磷灰石在高溫下燒結(jié)而成，以形成更硬，更堅固的層析介質(zhì)。羥基磷灰石因陶瓷化工藝不同分為 2 種類型：I 型和 II 型。

■I型對蛋白質(zhì)具有更大的保留，對酸性蛋白質(zhì)具有更大的動態(tài)載量，主要純化大部分蛋白質(zhì)。

■II 型由于孔徑較I型大，因而對抗體等大分子量蛋白質(zhì)的動態(tài)載量更高，而對白蛋白幾乎無保留，因而更適合于抗體的純化，同時II型對核酸具有更大的保留，能夠分辯單、雙鏈、是否超螺旋等各種高級結(jié)構(gòu)的核酸，因而也適合純化核酸。

■CFT 氟代磷灰石介質(zhì)具有和 CHT 陶瓷羥基磷灰石相似的蛋白選擇特性，但可以在更低的 pH 條件下進(jìn)行純化。

■顆粒大小選擇

羥基磷灰石的分離策略：

由于羥基磷灰石層析的上樣對 NaCl 不敏感，更適合作為中間純化和精純的常規(guī)步驟，經(jīng)第一步離子交換捕獲得到的樣品不需作任何脫鹽處理即可直接上樣純化，具有更高的分辨率。層析條件的摸索參數(shù)主要有：型號，磷酸鹽緩沖液的不同 pH，單梯度，雙梯度等等。

貨號	產(chǎn)品	包裝	動態(tài)載量	顆粒大小	pH穩(wěn)定性	推薦流速cm/hr	耐受壓力Psi/MPa
Bio-rad CHT陶瓷羥基磷灰石		球形巨孔的羥基磷灰石，避免了晶體材料的局限性，可用于工業(yè)層析柱，既保留了晶體羥基磷灰石獨te的分離特性，同時可在高流速大型層析柱反復(fù)使用。
158-2000	CHT Ceramic Hydroxy- apatite Type I	10g	25-60mg IgG/ml (300cm/hr, 40μm)	20μm	5.5-14	50-1,000	1,500/10.0
157-0020	CHT 陶瓷羥基磷灰石I 型	100g
157-0021		1kg
157-0025		5kg
158-4000	CHT Ceramic Hydroxy- apatite Type I	10g	25-60mg IgG/ml (300cm/hr, 40μm)	40μm	5.5-14	50-1,000	1,500/10.0
157-0040	CHT 陶瓷羥基磷灰石I 型	100g
157-0041		1kg
157-0045		5kg
158-8000	CHT Ceramic Hydroxy- apatite Type I	10g	25-60mg IgG/ml (300cm/hr, 40μm)	80μm	5.5-14	50-1,000	1,500/10.0
158-0080	CHT 陶瓷羥基磷灰石I 型	1kg
158-0081		5kg
158-0085		10g
158-2200	CHT Ceramic Hydroxy- apatite Type II	100g	15-25mg IgG/ml (300cm/hr, 40μm)	20μm	5.5-14	50-1,000	1,500/10.0
157-2000	CHT 陶瓷羥基磷灰石II 型	1kg
157-2100		5kg
157-2500		10g
158-4200	CHT Ceramic Hydroxy- apatite Type II	10g	15-25mg IgG/ml (300cm/hr, 40μm)	40μm	5.5-14	10-1,500	1,500/10.0
157-4000	CHT 陶瓷羥基磷灰石II 型	100g
157-4100		1kg
157-4500		5kg
158-8200	CHT Ceramic Hydroxy- apatite Type II	10g	15-25mg IgG/ml (300cm/hr, 40μm)	80μm	5.5-14	10-1,500	1,500/10.0
157-8000	CHT 陶瓷羥基磷灰石II 型	100g
157-8100		1kg
157-8500		5kg

* 介質(zhì)的包裝密度為0.63g/mL，約10g 的包裝可裝填17mL的層析柱。

貨號	產(chǎn)品	包裝	動態(tài)載量	顆粒大小	pH穩(wěn)定性	推薦流速cm/hr	耐受壓力Psi/MPa
Bio-Gel 羥基磷灰石HT和HTP		傳統(tǒng)羥基磷灰石凝膠，是純化蛋白、核酸及其它大分子的理想產(chǎn)品，其中Bio Gel HTP 凝膠大大提高了對DNA 的載量和選擇性。
130-0150	Bio-Gel HT Hydroxyapatite	250ml	10mgBSA/g		5.5-14	25-100
130-0151		500ml
130-0420	Bio-Gel HTP Hydroxyapatite	100g			5.5-14	35-100
130-0421		1kg
130-0425		5kg
130-0520	DNA grade	100g	>800ug DNA		5.5-14	>5
陶瓷氟代磷灰石CFT		最新的磷灰石介質(zhì)，pH 穩(wěn)定范圍更大，zui低pH 可達(dá)5.0，與CHT 陶瓷羥基磷灰石一樣支持雙梯度洗脫，載量更高，適宜于pH 低至5.0 時進(jìn)行的酸性蛋白質(zhì)的純化。均勻堅固的球形顆粒，可快速完成清洗和平衡。
158-5200	CHT 陶瓷羥基磷灰石II 型	10g	IgG: 30-32	40μm	5-14	50-300	800/5.5
157-5000		100g	溶菌酶:17-21
157-5100		1kg
157-5500		5kg

* 動態(tài)載量測定條件：線性流速150cm/hr，層析柱1.1×5.2cm，樣品1mg/mL 牛IgG 或2mg/mL 溶菌酶。

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