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Cygnus Vero細胞HCP ELISA檢測試劑盒的檢測原理
閱讀：1287發(fā)布時間：2023-2-1
CygnusVeroCellHCPELISAKitVero細胞HCP試劑盒檢測原理：
VeroCell檢測是一個雙位點酶聯(lián)免疫檢測。樣本中包含的VeroCellHCPs蛋白與標記有抗-VeroCell抗體的辣根過氧化物酶同時反應，反應發(fā)生在之前涂有一層吸附性抗-VeroCell蛋白抗體的微量滴定板中進行。免疫反構成為夾層式結構：固相抗休-HCP-酶標記抗體。反應結束后清洗微量滴定板去除未結合反應物。添加TMB作用底物反應。微量滴定板讀數(shù)器上測定水解物濃度，水解物濃度與VeroCellHCPs蛋白濃度成比例。用提供的標準液繪制標準曲線，根據(jù)讀數(shù)可以計算出VeroCellHCPs蛋白含量。
檢測過程：
取出所有試劑平衡到室溫→分別移取50µl標準液，對照物和樣品至待測孔→移取100µlanti-VeroCell:HRP（#F501）至每孔→密封滴定板，搖床室溫溫育2小時，180rpm→清空小孔，用紙吸干殘留液，350µl清洗緩沖液清洗4次→加100µlTMB作用物（#F005）→室溫靜置30分鐘，不需搖床→加100µl反應終止液（#F006）→分光光度計450/650nm讀數(shù)
結果分析：
標準液（0,2,8,25,75,200ng/mL）可用于制作標準曲線，標準液濃度相當于免疫反應HCP總濃度。根據(jù)測定的小孔中標準液吸光值繪制標準曲線。數(shù)據(jù)分析可以使用計算機選配曲線，例如點到點，三次樣本函數(shù)，或四參數(shù)邏輯曲線。不要使用線性回歸分析修改樣品吸光值，這樣會出現(xiàn)顯著誤差。也可以手工繪圖，Y軸標注吸光值，X軸標注濃度。然后根據(jù)樣品吸光值計算出樣品中HCP濃度。（操作時每一濃度標準液都要滴定到兩個小孔中，以便計算平均分光光度值，樣品也需計算平均吸光值）。
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