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測序試劑盒的捕獲具體步驟
閱讀：209發(fā)布時間：2025-4-2
測序試劑盒的捕獲步驟通常指的是在基因組測序過程中，如何從樣本中選擇和富集特定的目標(biāo)區(qū)域。捕獲步驟通常與目標(biāo)區(qū)域捕獲（TargetedCapture）技術(shù)相結(jié)合，主要用于高通量測序（NGS）中，通過選擇性地捕獲特定DNA片段以提高分析的靈敏度和準(zhǔn)確性。下面是捕獲步驟的概述：
1.樣本準(zhǔn)備
首先，需要從樣本中提取DNA。樣本可以是血液、組織、唾液等，提取過程會根據(jù)不同的樣本類型選擇不同的提取方法。提取后的DNA會被質(zhì)控，以確保其質(zhì)量和完整性滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求。
2.DNA片段化
為了便于后續(xù)的捕獲和測序，提取到的DNA需要經(jīng)過片段化。這一步驟通過物理（例如超聲波破碎）或酶切（如限制性內(nèi)切酶）的方法將DNA分解成適合捕獲的小片段。
3.目標(biāo)區(qū)域設(shè)計與探針合成
根據(jù)研究的需要，選擇目標(biāo)區(qū)域（例如特定基因、外顯子或其他感興趣的序列）。然后，合成與這些目標(biāo)序列互補(bǔ)的探針。探針通常是固定在微珠或其他固相支持物上的寡核苷酸序列。這些探針可以與樣本中的目標(biāo)DNA序列特異性結(jié)合。
4.目標(biāo)區(qū)域富集（捕獲）
在這一步，添加合成的探針與片段化的DNA進(jìn)行雜交。探針與目標(biāo)區(qū)域序列結(jié)合后，未結(jié)合的非目標(biāo)DNA序列會被洗脫掉。這個過程可以通過反應(yīng)體系中的條件控制，使目標(biāo)DNA區(qū)域與探針特異性結(jié)合。
5.洗脫
捕獲了目標(biāo)序列后，使用洗滌步驟去除非特異性結(jié)合的雜散DNA。通過一定的鹽濃度和溫度控制，確保只有目標(biāo)DNA區(qū)域被保留下來，而其他無關(guān)序列被去除。
6.擴(kuò)增（可選）
有時，為了提高捕獲序列的量，捕獲后的DNA片段會進(jìn)行PCR擴(kuò)增。這一步是為了增加目標(biāo)區(qū)域的信號強(qiáng)度，以確保后續(xù)測序的靈敏度。
7.文庫構(gòu)建
捕獲后的目標(biāo)區(qū)域DNA可以直接用于文庫構(gòu)建。文庫構(gòu)建過程中，DNA片段的兩端會連接適配器，以便后續(xù)的測序平臺進(jìn)行識別和擴(kuò)增。
8.測序
文庫構(gòu)建完成后，將其加載到高通量測序平臺（如Illumina、BGISEQ等）進(jìn)行測序，獲取高質(zhì)量的序列數(shù)據(jù)。
總結(jié)
捕獲步驟的關(guān)鍵在于目標(biāo)區(qū)域的選擇、探針設(shè)計以及洗脫過程，通過精確的操作，可以確保只富集出感興趣的區(qū)域，從而提高測序的效率和準(zhǔn)確性。
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