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　　一、流動(dòng)相不過(guò)濾

　　因?yàn)閴m?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會(huì)磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動(dòng)相中的任何固體微粒。流動(dòng)相最好在玻璃容器內(nèi)蒸餾，而常用的方法是濾過(guò)，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。

　　二、使用后沒(méi)有及時(shí)清洗泵

　　流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)保留在泵內(nèi)，尤其是在停泵過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間的情況下。如果將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細(xì)晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。因此，必須泵入純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)的溶劑（對(duì)于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。

　　三、流動(dòng)相走空

　　泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相被用完，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，最終產(chǎn)生漏液。

　　沒(méi)有流動(dòng)相流出，又無(wú)壓力指示怎么辦？可能是泵內(nèi)有大量氣體，這時(shí)可打開(kāi)泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運(yùn)轉(zhuǎn)，將氣泡排盡，也可用一個(gè)50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個(gè)可能原因是密封環(huán)磨損，需更換。

　　四、壓力和流量不穩(wěn)了？

　　原因可能是氣泡，需要排除；或者是單向閥內(nèi)有異物，可卸下單向閥，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗。有時(shí)可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡，或被鹽的微細(xì)晶粒或滋生的微生物部分堵塞，這時(shí)，可卸下砂濾棒浸入流動(dòng)相內(nèi)超聲除氣泡，或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nèi)迅速除去微生物，或?qū)Ⅺ}溶解，再立即清洗。

　　壓力為啥過(guò)高或過(guò)低？可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時(shí)應(yīng)逐段進(jìn)行。

　　在進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來(lái)一些特殊問(wèn)題，必須充分重視。

　　PS：在液相色譜中對(duì)組分復(fù)雜的樣品采用梯度洗脫的方法。在同一個(gè)分析周期中，按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比，稱為梯度洗脫。從而可以使一個(gè)復(fù)雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達(dá)到良好的分離目的。

　　梯度洗脫的優(yōu)點(diǎn)：

　　縮短分析周期；

　　提高分離能力；

　　峰型得到改善，很少拖尾；

　　增加靈敏度。但有時(shí)引起基線漂移。

　　五、梯度洗脫的流動(dòng)相選擇不當(dāng)

　　要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動(dòng)相。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶，使用時(shí)更要引起注意。當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時(shí)，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時(shí)需特別小心。

　　六、忽略的空白梯度洗脫

　　梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰，因?yàn)槿跞軇┲械碾s質(zhì)富集在色譜柱頭后會(huì)被強(qiáng)溶劑洗脫下來(lái)。用于梯度洗脫的溶劑需脫氣，以防止混合時(shí)產(chǎn)生氣泡。

　　七、忽略了溶劑混合所帶來(lái)的粘度變化

　　混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時(shí)常出現(xiàn)壓力的變化。

　　例如甲醇和水粘度都較小，當(dāng)二者以相近比例混合時(shí)粘度增大很多，此時(shí)的柱壓大約是甲醇或水為流動(dòng)相時(shí)的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過(guò)程中壓力超過(guò)輸液泵或色譜柱能承受的最大壓力。

　　八、關(guān)于六通閥的正確使用和維護(hù)

　　樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過(guò)濾，以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。

　　轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動(dòng)相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過(guò)泵的最大壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí)，過(guò)高的壓力將使柱頭損壞。

　　為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。

　　九、關(guān)于色譜柱的使用和維護(hù)

　　色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過(guò)程中，需要注意下列問(wèn)題，以維護(hù)色譜柱。

　　調(diào)節(jié)流速過(guò)快

　　避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩（如前所述）。

　　反沖色譜柱

　　一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。

　　預(yù)柱和保護(hù)柱

　　選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和"，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

　　避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。

　　十、【來(lái)自前輩的經(jīng)驗(yàn)】小概率故障如何排除？

　　1.泵壓跳動(dòng)，跳動(dòng)范圍10bar左右

　　解決方法：

　　原先小白頭有點(diǎn)臟，更換后尚未解決；

　　將主動(dòng)閥上的閥芯取出后，發(fā)現(xiàn)有類似氣泡存在，浸入甲醇-水溶液超聲5min，以試著去除氣泡，重新將其安裝后再觀察，仍未解決；

　　更換新的閥芯，將其安裝后，不再有跳動(dòng)，觀察一段時(shí)間后比較平穩(wěn)，成功解決。

　　2.發(fā)生故障

　　plug homing over pressure；

　　灌注及設(shè)流速時(shí)均無(wú)壓力也不見(jiàn)液體流出；

　　檢測(cè)器光閘不能復(fù)位④進(jìn)完大濃度樣品后，進(jìn)空白相應(yīng)位置也出峰。

　　可能原因：

　　在線過(guò)濾器堵了；

　　泵頭下單向閥堵了；

　　有可能是檢測(cè)池臟了，也有可能是光路有點(diǎn)堵，再不行可能是燈壽命到了；

　　小抹布臟了，需要換。

　　解決方法：

　　1.在線過(guò)濾器卸下來(lái)，置燒杯，加純化水煮沸5-10分鐘后甲醇超一下一般就可以了，如果還堵的話就拿稀硝酸泡，還不行的話就換新的了，這本身是個(gè)消耗品；2.把泵頭下單向閥卸下來(lái)，兩個(gè)都有可能堵，剛卸下來(lái)時(shí)豎著在耳邊搖一搖是聽(tīng)不到聲音的。簡(jiǎn)單的拿洗耳球把單向閥吹吹就行了（注意方向），吹了沒(méi)反應(yīng)可以拿溶劑超聲，但不可水煮，一般超至在耳邊搖能聽(tīng)見(jiàn)聲音就不影響實(shí)驗(yàn)；3.先用溶劑把檢測(cè)池沖沖，用啥試具體樣品而定；若沖了還不行，把檢測(cè)池卸下，看燈能量，若能量還可以（有個(gè)幾千），可能得清洗光路了。第一次清洗的話建議還是叫工程師來(lái)，因?yàn)榇謇淼牟考跈z測(cè)器的最下方，有一個(gè)黑色片片，中間有一條縫，而且那一塊的螺絲都是八角的，卸起來(lái)很麻煩；4.把5個(gè)樣品盤(pán)都拿出來(lái)，可以看見(jiàn)里面有一個(gè)黑色突起（看不清用手電筒），平時(shí)進(jìn)樣針就是從那個(gè)地方吸樣的。手伸進(jìn)去就可以卸下來(lái)，里面有一個(gè)小白圈圈（用多了自然就黑了），換一個(gè)新的就行了，買儀器時(shí)一般配有10個(gè)。