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吸光光度法測(cè)定的是顯色反應(yīng)達(dá)到平衡后溶液的吸光度，因此要得到準(zhǔn)確的結(jié)果，必須從研究平衡著手，了解影響顯色反應(yīng)的因素，控制適當(dāng)?shù)臈l件，使顯色反應(yīng)和穩(wěn)定。

1）根據(jù)溶液平衡原理，有色絡(luò)合物的穩(wěn)定常數(shù)越大，顯色劑過量越多，越有利于待測(cè)組分形成有色絡(luò)合物。但是過量顯色劑的加入有時(shí)會(huì)引起副反應(yīng)，對(duì)測(cè)定反而不利。

2）酸度對(duì)顯色反應(yīng)的影響是多方面的。一種金屬離子與某種顯色劑反應(yīng)的適宜酸度范圍是通過實(shí)驗(yàn)來(lái)確定的。確定的方法是固定待測(cè)組分及顯色劑的濃度，改變?nèi)芤簆H值，測(cè)定其吸光度，作出吸光度-pH值關(guān)系曲線，選擇曲線平坦部分對(duì)應(yīng)的pH值作為測(cè)定條件。

3）顯色反應(yīng)一般在室溫下進(jìn)行，有的反應(yīng)需要加熱，以加速顯色反應(yīng)，使之進(jìn)行反應(yīng)。

4）大多數(shù)顯色反應(yīng)需要經(jīng)過一定的時(shí)間才能完成，其長(zhǎng)短與溫度的高低有關(guān)，也會(huì)受到空氣的氧化或發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)使眼色顏色減弱。因此必須通過實(shí)驗(yàn)作出在一定溫度下的吸光度-時(shí)間關(guān)系曲線，得到適宜的顯色時(shí)間。

分光光度計(jì)在使用前，使用者應(yīng)該首先了解該儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個(gè)操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應(yīng)該對(duì)儀器的安全性能進(jìn)行檢查，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開關(guān)。