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上海拜力生物科技有限公司

當前位置:上海拜力生物科技有限公司>>細胞庫>>SX-C0376NCI-H838(人非小細胞肺癌細胞)

NCI-H838(人非小細胞肺癌細胞)

參   考   價: ¥ 16

訂  貨  量: ≥1

具體成交價以合同協(xié)議為準

產(chǎn)品型號:SX-C0376

品       牌:其他品牌

廠商性質(zhì):代理商

所  在  地:上海市

更新時間:2021-07-09 09:17:06瀏覽次數(shù):244

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供貨周期 現(xiàn)貨 應用領域 化工
產(chǎn)品名稱:NCI-H838(人非小細胞肺癌細胞)

貨號 :SX-C0376

培養(yǎng)基 :“*培養(yǎng)基有售,用我們拜力生物的*培養(yǎng)基,細胞培養(yǎng)更省心!“

規(guī)格 :5×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

供應商 :拜力生物

貨期 :7-10天

產(chǎn)品名稱:NCI-H838(人非小細胞肺癌細胞)

貨號 :SX-C0376

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供應商 :拜力生物

貨期 :7-10天

NCI-H838(人非小細胞肺癌細胞)實驗事項:

1.  試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。

2.   加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結(jié)合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的“預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。

3.   孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。

4.   洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數(shù)。

5.  試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。

6.  反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。

7.  底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。

    建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結(jié)果的準確性。

    如標本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

洗板方法

1.  手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,根據(jù)需要,重復此過程數(shù)次。

2.  自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

計算

  以標準物的濃度為縱坐標(對數(shù)坐標),OD值為橫坐標(對數(shù)坐標),在對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析,如curve expert 1.3,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

 ◇      注意事項:

收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分標本需添加抑肽酶。

◇      液體類標本

標本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積=100ul×檢測種類。

◇      血清:

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。

◇      血漿:

應根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。

◇      尿液、胸腹水、腦脊液:

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。

◇      細胞培養(yǎng)上清:

檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

◇      組織標本:

切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清置于-20度或- 70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

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