樣本采集:采集適量人靜脈血,室溫靜置,待血液自然凝固后,經(jīng)離心分離獲取血清樣本。采血過程需嚴格遵循無菌操作規(guī)范,避免樣本受到污染。采集后的血清樣本若不能及時檢測,應妥善保存于 - 20℃冰箱,且要注意避免反復凍融,以防影響抗體活性。
試劑盒準備:從冰箱取出試劑盒,在室溫(20℃ - 25℃)下平衡 30 分鐘,確保試劑盒內(nèi)各試劑溫度均勻。同時準備好移液器、吸頭、酶標儀等實驗器材,并檢查其性能是否正常,為檢測工作做好充分準備。
加樣:將標準品(如有)、待測血清樣本以及空白對照按規(guī)定體積準確加入微孔板相應孔中,輕輕振蕩混勻,使樣本與包被抗原充分接觸,隨后在設定溫度下孵育一定時間,促使抗原抗體反應充分進行。
洗板:孵育結(jié)束后,棄去孔內(nèi)液體,用洗滌液充分洗滌微孔板 3 - 5 次,徹di清除未結(jié)合的物質(zhì),有效降低非特異性信號干擾。每次洗滌后需將微孔板拍干,防止殘留液體影響后續(xù)反應結(jié)果。
加酶標抗體:向各孔加入適量酶標抗人 IgG 抗體,振蕩混勻后再次孵育,使酶標抗體與已結(jié)合的軍團菌 IgG 抗體充分結(jié)合。
顯色與終止:加入底物顯色液,在避光條件下孵育,待顏色變化至合適程度時,加入終止液終止反應,使反應停止在最佳檢測狀態(tài),以便準確讀取結(jié)果。
結(jié)果判定:立即使用酶標儀在規(guī)定波長下測定各孔 OD 值。若樣本 OD 值大于試劑盒給定的臨界值,則判定為陽性,表明樣本中存在軍團菌 IgG 抗體;若樣本 OD 值小于等于臨界值,則判定為陰性,即樣本中未檢測到軍團菌 IgG 抗體。對于具有定量功能的試劑盒,可根據(jù)標準曲線計算出樣本中軍團菌 IgG 抗體的具體含量。
高靈敏度:能夠檢測到極低含量的軍團菌 IgG 抗體,有助于發(fā)現(xiàn)早期感染或既往感染的潛在情況,為疾病診斷和病情評估提供有力支持。
特異性強:試劑盒中的抗原和酶標抗體對軍團菌 IgG 抗體具有高度特異性,與其他病原體抗體交叉反應極小,保證檢測結(jié)果的準確性,有效減少誤診和漏診。
操作簡便:整個檢測流程相對標準化,操作步驟清晰明了,經(jīng)過簡單培訓的人員即可熟練操作,適用于各級醫(yī)療機構(gòu)和實驗室。
結(jié)果穩(wěn)定:在規(guī)定的保存條件下,試劑盒內(nèi)各試劑性能穩(wěn)定,多次檢測同一批樣本,結(jié)果重復性良好,為臨床診斷和流行病學研究提供可靠的數(shù)據(jù)支撐。
軍團菌感染診斷:輔助診斷軍團菌感染,尤其是對于發(fā)病一段時間后的患者,IgG 抗體檢測可作為重要的診斷依據(jù),結(jié)合 IgM 抗體檢測,有助于判斷感染的階段。
病情監(jiān)測與預后評估:對于已確診的軍團菌感染患者,定期檢測血清中軍團菌 IgG 抗體水平,可了解病情發(fā)展趨勢和治療效果。若抗體水平逐漸下降,提示病情好轉(zhuǎn);若持續(xù)升高或維持在較高水平,可能意味著感染未得到有效控制或存在慢性感染情況。
流行病學調(diào)查:通過對特定人群血清中軍團菌 IgG 抗體的檢測,了解軍團菌在人群中的感染率和流行情況,為制定公共衛(wèi)生防控策略提供數(shù)據(jù)依據(jù)。