離體培養(yǎng)
ATCC細(xì)胞系一般要參考該種動物的體溫設(shè)計(jì)培養(yǎng)時所用溫度。通常哺乳動物的體溫在37－38.5°C，禽類略高些，溫度在39°C－40°C。因此，離體哺乳動物ATCC細(xì)胞系培養(yǎng)的溫度zui適為37－38.5°C。在較低溫度環(huán)境中，對ATCC細(xì)胞系影響不大，但細(xì)胞系對較高溫度卻比較敏感。
ATCC細(xì)胞系生長、繁殖的zui適條件是它們在機(jī)體內(nèi)所處的條件，但如將組織、細(xì)胞系從機(jī)體內(nèi)取出，讓其在離體條件下生存，那就必須模擬機(jī)體的環(huán)境。然而機(jī)體畢竟是太復(fù)雜了，所以在體外只能保證ATCC細(xì)胞系生長，繁殖所需要的zui基本因素，現(xiàn)簡單介紹這些因素的作用。
1.培養(yǎng)基（液）：ATCC細(xì)胞系培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基主要是人工合成的。通常其主要成分含有氨基酸、維生素、糖類、無機(jī)鹽、生長因子和其他的輔助物質(zhì)。當(dāng)然不同的組織和ATCC細(xì)胞系對培養(yǎng)基成分的要求有所不同，因而進(jìn)行培養(yǎng)時應(yīng)區(qū)別對待，為其選擇zui適條件的配方。配制時應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：
?。?）水是ATCC細(xì)胞系生命活動的重要因素之一，細(xì)胞系培養(yǎng)用的各種液體都要用水配制。由于有毒物質(zhì)和元素等即使含量很低也能引起細(xì)胞系培養(yǎng)的失敗，所以ATCC細(xì)胞系中所用的水必須經(jīng)過高度的純化。通常使用的是三次蒸餾水或去離子水。
水質(zhì)的好壞可用電導(dǎo)儀檢測其電阻值，即水中離子的導(dǎo)電狀況，越低的水含離子越少，電阻值也越高。一般以25°C時的歐姆（W）/cm表示。ATCC細(xì)胞系培養(yǎng)用水的電阻值一般選用100萬歐以上的去離子水為宜。
?。?）無機(jī)離子既是維護(hù)ATCC細(xì)胞系生命所需要的成分，而且對維持一定的滲透壓、緩沖和調(diào)節(jié)溶液的酸堿度等方面都起著重要的作用。所以在配制ATCC細(xì)胞系培養(yǎng)液時，必須根據(jù)這幾方面的需要，加入必需的一些無機(jī)鹽類。就多數(shù)動物來說，所需的無機(jī)鹽類有Na＋，K＋，Ca2＋，Mg2＋，Cl－，碳酸鹽，磷酸鹽等。它們彼此之間常保持一定的比例。破壞了這種關(guān)系，就會使培養(yǎng)的ATCC細(xì)胞系受到損害。
?。?）血清是ATCC細(xì)胞系培養(yǎng)液中的重要成分之一。血清中含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，如蛋白質(zhì)和核酸等，血清不僅為細(xì)胞系的生長提供所必需的營養(yǎng)，還具有促生長能力。血清對ATCC細(xì)胞系附著和生長均有明顯的促進(jìn)作用，并能中和有毒物質(zhì)的毒性，使細(xì)胞系不受到損傷。用于細(xì)胞系培養(yǎng)的血清來源是多種的，如人血清、馬血清、兔血清等。zui常用的是牛血清。一般講動物愈年輕，其血清愈有利于細(xì)胞系生長，故成年牛血清不如犢牛的好。ATCC細(xì)胞系培養(yǎng)中所用血清的質(zhì)量會直接影響到細(xì)胞系生長的狀況。
?。?） pH值對細(xì)胞系生長有影響。來源不同的細(xì)胞系，由于它們處于有機(jī)體的不同部位或器官，其所處外環(huán)境的pH值也不相同，所以在培養(yǎng)ATCC細(xì)胞系時，應(yīng)參考該ATCC細(xì)胞系在機(jī)體內(nèi)所處外環(huán)境的pH值配置適宜pH培養(yǎng)基（液）。一般以中性為好，剛開始培養(yǎng)的哺乳動物的細(xì)胞系，pH在7.0左右較好，貼壁生長的細(xì)胞系在pH7.2－7.4生長，以不超過pH6.8－7.6為宜。高于或低于此限度時，往往會引起細(xì)胞系死亡。在ATCC細(xì)胞系培養(yǎng)過程中，必須注意培養(yǎng)液pH值改變與細(xì)胞系生長的關(guān)系，找出規(guī)律。在pH值變得不適于ATCC細(xì)胞系生長時，應(yīng)及時更換新的營養(yǎng)液。
