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唾液酸分析指南，Ludger可提供唾液酸分析服務(wù)
點(diǎn)擊次數(shù)：3425 發(fā)布時(shí)間：2015-1-30
唾液酸分析指南如下，Ludger公司可以提供唾液酸分析的技術(shù)服務(wù)
NeuAc（唾液酸）和NeuGc（神經(jīng)氨酸）的定量分析是監(jiān)管機(jī)構(gòu)在生物制藥表征的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格指南中提出的一個(gè)要求。特別是,人類(lèi)和非人類(lèi)的唾液酸 (NeuAc / NANA和NeuGc / NGNA分別)相對(duì)水平測(cè)定是非常重要的,因?yàn)橛行┎∪擞懈咚降目股窠?jīng)氨酸（anti-NeuGc）抗體，這可導(dǎo)致中和反應(yīng)和快速清除含有神經(jīng)氨酸（NeuGc）的生物藥品 (Nguyen等,2005)。
由于唾液酸（NeuAc）和神經(jīng)氨酸（NeuGc）在分析糖蛋白中具有重要意義，它通常被認(rèn)為是生物治療藥物的關(guān)鍵質(zhì)量屬性(CQA)。
較廣泛的唾液酸（NeuAc）和神經(jīng)氨酸（NeuGc）比例確定方法是如下：
1. 通過(guò)輕度酸水解放糖蛋白上的唾液酸殘基。
2. 用1-1,2 - 二氨基-4,5 - 亞甲基苯酚（DMB）熒光標(biāo)記釋放的唾液酸。
3. 通過(guò)液相色譜法（HPLC）或超液相色譜法（UHPLC）對(duì)DMB標(biāo)記的唾液酸進(jìn)行相對(duì)定量分析。
Ludger的DMB標(biāo)記試劑盒（貨號(hào)：LT-KDMB-A1），提供從糖蛋白釋放唾液酸并用DMB標(biāo)記的所有功能。該試劑盒包含可以檢測(cè)高達(dá)22個(gè)糖蛋白樣品（每樣品含50-100 μg糖蛋白）的試劑和材料。每個(gè)標(biāo)記可標(biāo)記每個(gè)樣品中大約10 pmol到2.5 nmol的唾液酸。
試劑盒中包含一系列唾液酸的參考標(biāo)準(zhǔn)品（含Neuc，Neu5Gc，Neu5，7Ac2，Neu5，Gc9Ac，Neu5，9Ac2，Neu 5,7,（8），9Ac3Gc），以及NeuAc和NeuGc的定量標(biāo)準(zhǔn)品。這三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品可以隨著釋放的唾液酸樣品進(jìn)行DMB標(biāo)記。
系列稀釋液制備后的NeuAc和NeuGc定量標(biāo)準(zhǔn)品可用于定量分析。LudgerTag?DMB試劑盒中有提供關(guān)于如何制備的說(shuō)明. 如有需要NeuAc和NeuGc定量標(biāo)準(zhǔn)品也可在另行購(gòu)買(mǎi)，請(qǐng)跟我們。
作為陽(yáng)性對(duì)照，我們建議使用包含NeuAc和NeuGc唾液酸的胎球糖蛋白，我們同樣建議使用zui純化的LudgerBioQuantTM糖肽標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)作為陽(yáng)性對(duì)照。這個(gè)糖肽標(biāo)準(zhǔn)品（貨號(hào): BQ-GPEP-A2G2S2-10U）是一個(gè)復(fù)雜的N-連接雙觸角聚糖，終止于兩個(gè)N-乙酰神經(jīng)氨酸。
使用此標(biāo)準(zhǔn)品可以檢查聚糖釋放、標(biāo)記和回收的有效性，并可增強(qiáng)您的唾液酸測(cè)量準(zhǔn)確性。Ludger還銷(xiāo)售可用于識(shí)別Neu5，9Ac2的標(biāo)準(zhǔn)品。水可以作陰性對(duì)照。
圖1：由LS-UR2 UHPLC色譜柱（貨號(hào)LS-UR2-2.1x100）分析出來(lái)的DMB-標(biāo)記唾液酸對(duì)照品。
為了檢測(cè)聚糖的分離該對(duì)照品也可以作為跑樣之前的系統(tǒng)適用性標(biāo)準(zhǔn)品。
唾液酸分析相關(guān)產(chǎn)品
商品型號(hào) | 英文品名 | 中文品名 | 包裝 |
LT-KDMB-A1 | DMB Sialic Acid Labeling Kit | DMB 唾液酸釋放標(biāo)記試劑盒 | 1Reaction Set |
LS-R1-4.6x150 | Ludger Sep R1 HPLC Column | R1 HPLC 色譜柱-唾液酸 | 4.6 x150 mm |
LS-UR2-2.1x100 | Ludger Sep UR2 UHPLC Column–sialic acids | UR2 UHPLC 色譜柱-唾液酸 | 2.1 x 100 mm |
CM-NEU-AC-01 | N-acetylneuraminic acid quantitative standard | N-乙酰神經(jīng)氨酸定量標(biāo)準(zhǔn)品 | 1 nmol |
CM-NEU-GC-01 | N-glycolyneuraminic acid quantitative standard | N-羥乙酰神經(jīng)氨酸定量標(biāo)準(zhǔn)品 | 1 nmol |
CM-NEU5,9,AC-01 | N-acetylneuraminic acid qualitative standard | N-乙酰神經(jīng)氨酸定性標(biāo)準(zhǔn)品 | 1 nmol |
BQ-GPEP-A2G2S2 | A2G2S2 glycopeptide standard | A2G2S2 糖肽標(biāo)準(zhǔn)品（用于唾液酸釋放和標(biāo)記過(guò)程） | 10 μg |
GCP-FET-50U-X4 | Fetuin Glycoprotein (4 x 50 ug) | 胎球糖蛋白（4×50微克）（唾液酸化陽(yáng)性對(duì)照） | 4 x 50 μg |