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ELISA試劑盒做標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品檢測時(shí)需要注意:
1)設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實(shí)驗(yàn)樣品的濃度,2)即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi),包括上限和下限,而對于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線,盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度zui陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
2)樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出來的,所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事,否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無從談起。
3)用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度,這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。
4)檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí),應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準(zhǔn)確性。
5)標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個(gè)點(diǎn),但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。
6)做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動,但一般來說,相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98,對于有些實(shí)驗(yàn),至少要0.99甚至是0.999。
ELISA試劑盒浸泡式洗滌方式步驟:
(1)吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;
(2)用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);
(3)浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖動,浸泡時(shí)間不可隨意縮短;
(4)吸干孔內(nèi)液體,吸干應(yīng)*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;
(5)重復(fù)操作c和d,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定),如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時(shí)間。
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